一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗MED1（中介體復合物亞基1）多克隆抗體（貨號：A300-793A），經抗原親和純化，特異性識別人類和小鼠MED1蛋白。抗體適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB），以未偶聯（Unconjugated）的全IgG形式提供，濃度高達1000 µg/ml。產品保存于2–8°C，有效期自收貨之日起為1年，原產于美國，適用于轉錄調控、核受體信號通路及RNA聚合酶II依賴性基因表達研究。

二、核心技術規格

參數項 | 具體規格

靶標 | MED1（中介體復合物亞基1）

反應種屬 | 小鼠、人

適用實驗 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 全IgG

免疫原 | 人MED1蛋白1531位至C末端（1581位）區域

同種型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯 |

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬來源 | 人

濃度 | 1000 µg/ml

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

表位信息：抗體識別的表位定位于人MED1蛋白第1525位至C末端（第1581位）之間的區域（參考序列NP_004765.2，GeneID 5469）。該C末端區域包含核受體相互作用結構域，遠離中介體復合物的核心組裝界面，確保免疫沉淀后仍可檢測到完整的中介體復合物。

三、產品制備與質量控制

3.1 純化工藝

抗體采用抗原親和純化：將對應人MED1蛋白C末端區域（1525–1581位）的合成多肽或重組蛋白片段共價固定于固相支持物上，使兔免疫血清過柱，特異性IgG被吸附；經充分洗滌去除未結合蛋白后，以低pH緩沖液洗脫目標抗體，隨后中和、透析并置換至含防腐劑的緩沖液中。

3.2 濃度測定

免疫球蛋白濃度通過比爾-朗伯定律確定：1 mg/ml純化IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本產品批次實測A280值經換算確保濃度為1000 µg/ml，批間一致性高。

3.3 純度與特異性驗證

抗原親和純化工藝可有效去除兔血清中的非特異性IgG及其他血清蛋白。經SDS-PAGE和考馬斯亮藍染色評估，抗體純度典型值≥95%。功能性特異性通過以下方式驗證：

在MED1敲除細胞裂解物中WB檢測無信號

過表達MED1的細胞中信號顯著增強

免疫沉淀后質譜鑒定確認僅富集MED1及其已知相互作用伙伴（如核受體、中介體復合物亞基）

四、推薦應用與稀釋方案

以下用量和稀釋范圍為推薦起始值。由于不同實驗體系存在差異，用戶需根據預實驗結果進行優化。

4.1 免疫印跡（Western Blot，WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000

封閉與抗體稀釋液：含5%脫脂奶粉的TBST（Tris緩沖鹽+0.1% Tween-20）

一抗孵育條件：4°C 過夜（推薦）

推薦二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體，貨號A120-101P

特殊注意事項：當對免疫沉淀產物進行WB檢測時，建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體（輕鏈特異性），并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免重鏈交叉反應干擾。

陽性對照：HeLa、HEK293T或小鼠肝組織裂解液。MED1在多種細胞系中普遍表達，分子量約為220 kDa（MED1因高度磷酸化在SDS-PAGE中實際表觀分子量約為200–220 kDa，與理論值1581個氨基酸~170 kDa有差異）。

操作提示：MED1分子量較大（>200 kDa），建議使用6–8% SDS-PAGE凝膠以提高大分子量蛋白的分離效果。轉膜推薦使用0.45 µm PVDF膜，采用濕轉法（100 V，2小時或4°C過夜轉膜），并在轉移緩沖液中添加0.01% SDS以促進大蛋白遷移。

4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細胞裂解液總蛋白

裂解液選擇：推薦使用溫和非變性裂解液（如含150 mM NaCl、0.5% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4、蛋白酶抑制劑混合物）。為避免MED1降解，需添加廣譜蛋白酶抑制劑（如PMSF、亮抑肽酶、胃蛋白酶抑制劑）。MED1是磷酸化蛋白，建議額外添加磷酸酶抑制劑（如正釩酸鈉、β-甘油磷酸酯）。

孵育條件：裂解液與抗體4°C旋轉孵育2–4小時或過夜，隨后加入Protein A瓊脂糖珠繼續孵育1–2小時。

洗脫：可采用SDS-PAGE上樣緩沖液煮沸5分鐘洗脫，或使用低pH甘氨酸緩沖液進行非變性洗脫。

陰性對照：使用同種型兔IgG（非免疫IgG）進行平行沉淀，以評估非特異性背景。

注意：因MED1是中介體復合物的核心亞基，免疫沉淀可同時富集整個中介體復合物（約25個亞基）。建議使用溫和洗滌條件（如含150 mM NaCl的裂解液洗滌3–4次）以維持復合物完整性。

4.3 免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）

推薦稀釋范圍：1:1,000 – 1:5,000

抗原修復：推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（10 mM，pH 6.0）進行熱誘導抗原修復（微波或高壓）

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

檢測系統：推薦使用聚合物標記的HRP二抗系統

陽性對照組織：人乳腺癌組織、前列腺癌組織或小鼠肝組織。MED1在增殖活躍的細胞核中呈強陽性。

IHC操作提示：MED1定位于細胞核，染色呈彌散或斑點狀分布。建議在封閉步驟中使用5%正常山羊血清阻斷非特異性結合。一抗4°C孵育過夜可獲得最佳信噪比。