一、標記策略概述

寡核苷酸的熒光素標記有多種技術路徑可供選擇，具體方案取決于實驗對熒光光譜特性的要求。針對5'端標記，可使用三種CE亞磷酰胺單體，源于單一異構體6-羧基熒光素的5'-熒光素亞磷酰胺、5'-六氯熒光素亞磷酰胺（HEX）以及5'-四氯熒光素亞磷酰胺（TET）。對于3'端標記，則采用3'-熒光素CPG固體載體。上述所有標記方式均可在標準氨水裂解與脫保護條件下釋放熒光素標記的寡核苷酸產物。

二、產品關鍵參數

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的6-HEX 亞磷酰胺（5'-六氯熒光素亞磷酰胺），貨號：AAT-6024，參數如下：

參數 | 規格

外觀 | 白色固體

分子量 | 1050.61

溶解性 | 可溶于乙腈

激發波長 | 533 nm

發射波長 | 559 nm

儲存條件 | 冷凍（<-15℃），避光

有效期 | 收貨后6個月

三、光譜特性與應用選擇

HEX標記物的激發峰位于533 nm，發射峰位于559nm，處于熒光素的黃綠色光譜區域。根據多重檢測需求，三種熒光素標記物在洗手和發射波長上存在細微偏倚，可在同一反應體系內實現多目標區分檢測。

四、操作要點與注意事項

標記反應遵循標準固相合成流程，5'端標記使用亞磷酰胺單體在終循環偶聯步驟加入，，3'端標記則從CPG載體起始合成。氨水處理條件與未修飾寡核苷酸相同，無需額外步驟。產品應嚴格避光保存于-15℃以下，溶解于乙腈后建議盡快使用，避免反復凍融及光照引起熒光淬滅。

文獻參考：

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Modified oligonucleotides containing lithocholic acid in their backbones: their enhanced cellular uptake and their mimicking of hairpin structures

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Diels--Alder bioconjugation of diene-modified oligonucleotides

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