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在細(xì)胞生物學(xué)中，一個(gè)常見的問題是如何獲取與細(xì)胞功能相關(guān)的各種定量測量信息。在免疫細(xì)胞化學(xué)中也存在同樣的問題。制作免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本環(huán)節(jié) 較多，只要有一個(gè)環(huán)節(jié) 失誤就會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，除了需要精制的藥品外，還需要熟練的技術(shù)。那么，做成了理想的標(biāo)本后，如何進(jìn)行觀察，才能獲得盡量多的的各種定量信息，而且使這些信息能較客觀的反映出來，這就是本章 的編寫目的。

一、定量分析的重要性

目前有許多研究免疫細(xì)胞化學(xué)的文章 ，是做定性和定位研究的。如有文獻(xiàn)中提到，P物質(zhì)在腦組織中存在于30處以上，這只是解決了定性定位問題，這些部位含P物質(zhì)的量是否相同？可否用快速簡便的方法對細(xì)胞內(nèi)免疫反應(yīng)產(chǎn)物的量進(jìn)行分析？從而可進(jìn)行比較。所謂反應(yīng)產(chǎn)物的“量”包括顏色深淺，其所占的長度或面積等，就要借助于圖像分析儀（image analyzer）了。

以往我們對免疫細(xì)胞化學(xué)或一般組織化學(xué)光鏡標(biāo)本的觀察，對反應(yīng)產(chǎn)物的量常用“+”號表示，一般可分為0～+++，共五個(gè)等級，這種方法對差別較大的標(biāo)本當(dāng)然還是可以用的，但存在以下三方面的問題：①同一張標(biāo)本，不同的觀察者可以得到出不同的結(jié)論，因?yàn)檫@種分級沒有明確的客觀標(biāo)準(zhǔn)；②即使同一張標(biāo)本同一個(gè)觀察者，間隔若干天后進(jìn)行再次觀察時(shí)，可能結(jié)論也不一樣的；③后一點(diǎn)也是重要的一點(diǎn)，人的視覺是有一定限制的，用一般觀察法實(shí)際上已經(jīng)丟失掉了許多可貴的信息，因?yàn)槟悴煊X不到實(shí)際上存在的較小的差異。因此我們力求有一個(gè)客觀的比較精密的標(biāo)準(zhǔn)。除了常用的儀器如顯微分光光度計(jì)(microspectrophotometer)和顯微密度計(jì)（microdensitometer）等以外，還可用圖像分析儀進(jìn)行測量。前二者已有許多有關(guān)著作中介紹過，就其與靈敏來說都是夠的，但卻不能同時(shí)測出標(biāo)本中某些成分的面積、體積或長度等其他極有用的參數(shù)。圖像分析儀的分析廣度則要大得多，并能明顯地提高工作效率，所得到的各種數(shù)據(jù)可通過分析儀上的計(jì)算機(jī)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，只要將各種統(tǒng)計(jì)學(xué)公式輸入計(jì)算機(jī)，選擇其中你所采用的公式，即可快速得出分析結(jié)果，告訴你有無顯著性差異。

二、圖像分析儀簡介

圖像分析儀又稱圖像分析系統(tǒng)（image analysis system），主要用來解決如何客觀地較地用數(shù)字來表達(dá)存在于標(biāo)本中的各種信息，可稱為數(shù)學(xué)形態(tài)學(xué)。它已經(jīng)成為一種*的科學(xué)研究工具，并且逐漸展現(xiàn)出巨大的潛能。圖像中包含著極其豐富的內(nèi)容，是人們從客觀世界中獲得信息的重要手段，因此，正確地測量和處理圖像已成為測量技術(shù)中的重要課題，并廣泛應(yīng)用于航空遙感測量、金屬圖像測量、微電子技術(shù)中微圖形檢測、精密機(jī)件尺寸檢測，光波干涉圖、醫(yī)學(xué)生物學(xué)的研究及應(yīng)用等有關(guān)領(lǐng)域中。圖像測量將會隨著信息科學(xué)和人工智能的發(fā)展而日益顯示其重要作用。現(xiàn)代圖像測量是光學(xué)、電子學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)等相互滲透的跨學(xué)科的結(jié)果，涉及廣泛的學(xué)科領(lǐng)域，醫(yī)學(xué)只是其中一個(gè)分支。

我們在光學(xué)顯微鏡下看到的是光學(xué)圖像，而在圖像分析儀屏幕上看到的是電子圖像，因此在顯微圖像分析中，整個(gè)系統(tǒng)重要關(guān)鍵的工作就是要保證得到的電子圖像能地反映出光學(xué)圖像，這個(gè)過程由攝像機(jī)（圖像掃描器）、顯像管和圖像處理機(jī)（計(jì)算機(jī)）來完成（圖9-1）。圖像可通過光學(xué)顯微鏡、透射電鏡或掃描電鏡傳到攝像機(jī)而產(chǎn)生電信號，照片或膠卷上的圖像也可以通過攝像機(jī)反映到電視屏幕上進(jìn)行分析。圖像在電視屏幕上是由許多像素（pixel）構(gòu)成的，單位面積屏幕上像素愈多則圖像愈清晰，即分辨率愈高。各廠家生產(chǎn)各種不同規(guī)格的產(chǎn)品，如有640×480像素的、896×704像素的、512×480像素的屏幕等。當(dāng)圖像顯示時(shí)，每個(gè)像素含有兩方面的信息，即此像素的灰度及其在標(biāo)本中的位置，兩種信息決定了圖像的形狀和顏色深淺。

圖9-1 圖像分析系統(tǒng)簡圖

有關(guān)圖像分析的學(xué)術(shù)活動，1963年召開了屆討論會，此后每四年有一次學(xué)術(shù)交流活動。1983年在美國召開了第六屆學(xué)術(shù)會議，與會代表約150人。1987年9月在法國召開了第七屆學(xué)術(shù)會議，在200多正式代表中有2/3是生物醫(yī)學(xué)方面的專家，而我國生物醫(yī)學(xué)界沒有人被邀參加，可見我國過去對如何將圖像分析應(yīng)用于醫(yī)學(xué)生物學(xué)方面的研究重視得不夠，對上這方面的信息掌握得不及時(shí)。國內(nèi)自70年代末期相繼從國外引進(jìn)大型自動圖像分析儀后，80年代才開始將醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究與圖像分析方法結(jié)合起來。從1981～1983年召開了三次全國體視學(xué)與圖像圖像分析學(xué)術(shù)會議，1987年召開了第四次學(xué)術(shù)會議，雖然在宣讀的論文中醫(yī)學(xué)研究已占了很大的比例，但具體應(yīng)用到免疫細(xì)胞化學(xué)則實(shí)例極少，僅是一個(gè)開端。1988年中國體視學(xué)會正式成立，是在民政部登記的屬于新學(xué)科的個(gè)學(xué)會。并于1991年11月在重慶第三軍大學(xué)召開了“全國計(jì)量學(xué)在形態(tài)學(xué)研究中應(yīng)用研討會”，與會代表來自22個(gè)省市，形態(tài)計(jì)量學(xué)的方法已應(yīng)用到組織學(xué)、解剖學(xué)、病理學(xué)、細(xì)胞學(xué)等領(lǐng)域。更為可喜的是過去此類研討會都是請外商到會介紹他們的產(chǎn)品，為他們提供中國市場，而此次會議上本國的三家研制生產(chǎn)圖像分析儀的單位在大會上介紹各自的產(chǎn)品，以較好的性能價(jià)格比與國外產(chǎn)品競爭，擴(kuò)大國內(nèi)市場，我國在此領(lǐng)域的研究進(jìn)展也是很快的。

三、常用的測量方法

（一）灰度

灰度（grey level）指圖像各種分顏色的深淺程度。比較的圖像分析儀可將灰度分成為256級，也有的只能將灰度分成64級，總之都是2n,24是26256是28。免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本上反應(yīng)產(chǎn)物的染色深淺即可用灰度來表示。能將一張標(biāo)本上不同染色深度區(qū)分為幾十或更多的等級，這是人眼所不及的。因此，某些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，如果用光學(xué)顯微鏡作一般的觀察，似乎實(shí)驗(yàn)組與對照組無明顯差異，而用圖像灰度法經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，則可反映出顯著性差異，說明僅僅用顯微鏡觀察是不夠的，在某些情況下可能會辜負(fù)了制片過程中所花費(fèi)的大量精力，而得不到應(yīng)有的結(jié)果。

由于免疫反應(yīng)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)不一定是均勻分布的，在同一個(gè)細(xì)胞中就可產(chǎn)生各種灰度，這種情況如何進(jìn)行比較？有兩類方法可供選用：一種是測每個(gè)細(xì)胞的平均灰度，近年較新型的圖像分析系統(tǒng)有此性能，而比較早期的或比較簡單的圖像分析系統(tǒng)就沒有這種性能，例如某一細(xì)胞在電視屏幕上占有120個(gè)像素，按灰度級進(jìn)行測量后，也許120個(gè)像素中有十多種不同的灰度，分析儀可立即顯示其平均灰度。另一種方法是在反應(yīng)產(chǎn)物不均勻的細(xì)胞中可用每一種灰度所占的百分率來表示，例如你要觀察1000個(gè)細(xì)胞，在這些細(xì)胞中各種灰度所占的百分率可測出，并作出曲線，或用其他統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理，來進(jìn)行比較。

如果用彩色圖像分析儀，除了上述的灰度測量以外，還可以將不同的灰度編成不同的顏色，使圖像更鮮明美麗，而且便于測量。彩色有兩種情況：在屏幕上出現(xiàn)與標(biāo)本一樣的顏色稱為真色（real color），如果將不同的灰度轉(zhuǎn)換成不同的顏色則稱為假色（pseudo color），應(yīng)用假色的目的是增強(qiáng)對比度，來改善對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的視覺識別，同時(shí)可增強(qiáng)輪廓用來強(qiáng)調(diào)結(jié)構(gòu)的細(xì)節(jié) 。例如，免疫細(xì)胞化學(xué)中常用的非標(biāo)記抗體過氧化物酶—抗過氧化物酶法，終反應(yīng)產(chǎn)物呈棕色，假設(shè)在腦內(nèi)某核團(tuán)的許多細(xì)胞中，呈現(xiàn)出不同深度的棕色，深淺差別較大者顯示在屏幕上人眼還能區(qū)別，若差別小的則不易區(qū)別了，操作者可將灰度11～15用紅色顯示，灰度16～20用藍(lán)色顯示、灰度21～25用黃色顯示、灰度26～30用綠色顯示等。一般可呈現(xiàn)數(shù)十種顏色。也可以將灰度11～20用深紅色顯示、灰度21～30用淡紅色顯示、灰度31～40用藍(lán)色顯示等，由操作者隨心所欲加以編輯。這種圖像如拍攝下來，旁邊顯示出一條彩色帶，表明什么顏色代表什么范圍的灰度，如此可將一種顏色的免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本轉(zhuǎn)換成多種彩色的，對比鮮明的照片。

有些圖像分析儀中帶有光密度計(jì)組件，光密度計(jì)能將掃描器視頻信號變換成對數(shù)等值，然后數(shù)值化，就能用光密度單位來校正。因此，光密度計(jì)把被測物的積分光密度作為主要輸出，所謂積分光密度即各個(gè)單獨(dú)探測的像素密度分布的總和。因?yàn)槿菀椎玫奖粶y物的面積，也就很容易求出平均密度。光密度在細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的定量領(lǐng)域內(nèi)極為有用。灰度是一種相對值，因?yàn)槟憧蓪?biāo)本上的灰度隨你編輯分為64級、也可將其分為128級或者256組，而光密度是值。在文獻(xiàn)中光密度常用OD表示（optical density）。有的單位購置了圖像分析儀后才發(fā)現(xiàn)不能作光密度測量，但已無法再去掉換，所以在購買前必須詳細(xì)了解其性能，包括屏幕像素?cái)?shù)、有無光密度計(jì)組件等。

（二）長度

形狀不規(guī)則的線形組織結(jié)構(gòu)，一般方法很難計(jì)算出其長度，如組織中的毛細(xì)血管，神經(jīng)纖維、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)中的各種膜性結(jié)構(gòu)等，以往常用排列稀疏或密度集等詞描述，圖像分析儀則可測出各種圖像周界線的長度。例如：在活檢組織的子宮頸上皮細(xì)胞的電子顯微鏡照片上，測出在一定范圍的細(xì)胞膜長度為8128像素，橋粒長度為1229像素，計(jì)算出橋粒長度占細(xì)胞膜總長度的15%，wiernik等用此方法觀察到癌細(xì)胞的橋粒值遠(yuǎn)小于正常細(xì)胞，提出這可能與癌細(xì)胞易于失去相互間的的細(xì)胞連接，從而形成轉(zhuǎn)移有關(guān)。用免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示的神經(jīng)纖維，在局部組織中可能出現(xiàn)縱橫交錯的復(fù)雜圖像，用圖像分析儀可獲得單位面積內(nèi)神經(jīng)纖維的總長度。又如去甲腎上腺素神經(jīng)纖維呈串珠樣，如果測出一定范圍內(nèi)神經(jīng)纖維總長度及局部膨大數(shù)目，即可計(jì)算出串珠平均間隔距離，比較。

（三）面積

無論是在光鏡或電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本的觀察中，都要涉及有關(guān)標(biāo)本中某些結(jié)構(gòu)的面積問題。即使是極不規(guī)整的結(jié)構(gòu)，用圖像分析法容易算出其面積。在一定的放大倍數(shù)下，每μm2中含多少像素可以測出，畫出待測結(jié)構(gòu)的輪廓，在所勾畫的范圍內(nèi)含多少像素是立即可顯示出來的，這樣，很快可算出面積的數(shù)值。例如免疫電鏡技術(shù)中的鐵蛋白法、膠體金法等，可用上述方法進(jìn)行單位面積中反應(yīng)產(chǎn)物顆粒的計(jì)數(shù)，可進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)條件的比較。

曾有人在肝臟切片上進(jìn)行圖像分析，在一定范圍內(nèi)所有細(xì)胞核的總面積顯示為51554像素，其中肝細(xì)胞核總面積為27431像素，可知肝細(xì)胞核占全部細(xì)胞核總面積的53%。

四、圖像分析儀工作程序

使用者對硬件不需操縱，它們可完成復(fù)雜的運(yùn)行過程，完整的計(jì)算機(jī)軟件可按實(shí)際需要使其執(zhí)行功能。對操作者來說，圖像分析儀的實(shí)際操作很少，幾乎*是通過一個(gè)稱為光電鼠標(biāo)（mouse）的附件來操縱的。計(jì)算機(jī)屏幕上顯示出多項(xiàng)指令，可由光電鼠標(biāo)來指明你所需要的程序，光電鼠標(biāo)可控制計(jì)算機(jī)屏幕上的一個(gè)光標(biāo)，移動光電鼠標(biāo)也隨著移動，將光標(biāo)移到計(jì)算機(jī)屏幕上顯示的某項(xiàng)功能的區(qū)域內(nèi)，就表示選擇了該項(xiàng)功能，可以開始工作，極簡便。圖9-1為圖像分析儀的簡化圖。

圖像分析儀主要包括輸入（input）、中央信息處理機(jī)（central processor）和輸出（output）三大部分。實(shí)際上，工作程序并不是一成不變的，后面的步驟的信息常會反饋到前面，于是又重復(fù)前面的程序，具體步驟如下：

1．標(biāo)本成像 移動標(biāo)本使需要觀察的部位在電視攝像機(jī)上得到適當(dāng)放大的圖像，標(biāo)本包括組織切片或電鏡照片或照相底片等。

2．圖像獲取 用電視攝像機(jī)或其他方法將圖像轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枺诖诉^程中，攝像機(jī)的性能極重要，不能使用那些便宜的適用于監(jiān)視的電視攝像機(jī)，一定要用使圖像具有很好的清晰度的攝像機(jī)。

3．加強(qiáng)圖像 加強(qiáng)電子圖像（electronic image）使其更適合于分析。

4．檢測檢測（detection ）是圖像分析過程中設(shè)法從圖像中確定并且分離出需要分析灰度相的步驟，“相（phase）”是圖像中我們想要測量的部分的總稱。檢測是通過選擇一定的閾值來完成的，如果所需相比背景暗，那么所有暗于下限的東西都被選，例如相的灰度是20～50，20是下限，50是上限，背景的灰度小于20，檢定時(shí)暗于灰度20的東西都被選。如果所需相比背景亮，如免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的標(biāo)本，那么亮于上限的東西都被選。如果所需相比背景亮，如免疫熒光化學(xué)技術(shù)的標(biāo)本，那么亮于上限的東西都被選，例如相的灰度是5～20，5是下限，20是上限，背景灰度大于20，所謂上限既指比灰度20淺的亦即灰度20以下的相被選，而背景是暗于上限的，不被選作測量。如果相暗于圖像某些部分而又亮于圖像的另一些部分，那就要在二限之間的部分選擇灰度了。

在檢測過程中要使用圖像框（image frame）和測量框（measurement frame）。檢測只在圖像框內(nèi)進(jìn)行，框的大小按需要而定，測量框在圖像之內(nèi)，是進(jìn)行測量的部位。兩個(gè)框之間的部分稱為保險(xiǎn)區(qū)（圖9-2）。

圖像中每個(gè)被測物都有其*的特征計(jì)算點(diǎn)（feature count point, FCP）,FCP在被測物的點(diǎn)，如圖9-2中上面10個(gè)被測物的FCP均在測量框內(nèi)，可計(jì)數(shù)或作其他測量，而下面2個(gè)被測物的FCP不在測量框內(nèi)，則不計(jì)在內(nèi)，在測其他區(qū)域時(shí)再計(jì)算，有的被測可能被測量框截?cái)啵敲礈y量框外的那部分被測物應(yīng)該位于保險(xiǎn)區(qū)，即保險(xiǎn)區(qū)要大于被測物，才能觀察FCP是否在測量框內(nèi)而決定取舍。這樣當(dāng)換到相鄰的區(qū)域進(jìn)行測量時(shí)，不會使某圖形重復(fù)測量，可避免測量誤差，圖9-3顯示放置標(biāo)本的顯微鏡載物臺的移動方式，可由計(jì)算機(jī)控制，用編制好的程序，使載物臺按一定方式移動，也可以人工操作。圖中可以看出每個(gè)部位都將通過測量框，不會遺漏。

圖9-2 示測量框位置，圖中有10個(gè)被測物的FCP在測量框內(nèi)

5．陰影校正校正圖像細(xì)節(jié) 直到正確無誤并達(dá)到能被測量的要求。所謂陰影（shading）是指人眼看來是均勻的視場內(nèi)存在著不均勻的電子反應(yīng)，這使得灰度相同的圖像成分由于在視場中所處位置不同而顯示出不同的灰度，這種影響必須校正才能使圖像得到準(zhǔn)確測量。陰影有三個(gè)主要的來源：

（1）圖像源的不均勻的光照。

（2）穿過透鏡時(shí)光路發(fā)生變化引起的透鏡陰影。

（3）顯像管本身的圖像靈敏度差異引起的掃描陰影。]

任何圖像分析在具體運(yùn)用中都有這些陰影存在，前二者可通過精密安裝圖像分析儀來控制，后者可通過對顯像管的質(zhì)量嚴(yán)格篩選來減少影響。陰影可貯存起來，并且在每上次掃描時(shí)同步地從圖像信號中去掉。

圖9-3 顯微鏡載物臺移動方式1.載物臺移動方向；

2.暈微鏡觀察視場；3.圖像框；4.測量框

6．測量經(jīng)以上各步驟后，可以用圖像分析儀的計(jì)算機(jī)對圖像進(jìn)行測量來取得所需的參數(shù)，如灰度、面積、長度、個(gè)數(shù)等。原始的參數(shù)可由計(jì)算機(jī)轉(zhuǎn)化成容易理解的數(shù)值，例如面積可由某圖形所占像素?cái)?shù)轉(zhuǎn)化為平方微米，使觀察者容易理解。

7．資料分析 將資料進(jìn)行分類，并加以說明，以便做出結(jié)論。也可將資料貯存，隨意可提取出來，供研究者使用。

8．其他事項(xiàng)

（1）標(biāo)本要清潔：如果標(biāo)本上有污點(diǎn)，研究者可分辨哪些是正常的免疫反應(yīng)產(chǎn)物，哪些是污染引起的，但儀器不會區(qū)別，只要是電視屏幕上測量框內(nèi)有的東西都會被測量，如測灰度時(shí)切片上有污點(diǎn)，會影響結(jié)果。

（2）電壓要穩(wěn)定：這一點(diǎn)是結(jié)合我國目前情況而言，雖然儀器使用時(shí)是通過穩(wěn)壓器的，也要經(jīng)常注意穩(wěn)壓器上的電壓指針是否穩(wěn)定，否則也影響結(jié)果。

（3）價(jià)格問題：圖像分析儀廣泛應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，因此并不是價(jià)格愈貴就愈好，而要看我們的應(yīng)用目的及其性能，以免購置一些用不著的昂貴的附件而造成浪費(fèi)。一般可以從以下三方面來考察儀器性能：在本專業(yè)范圍內(nèi)應(yīng)用的廣度、運(yùn)算的速度和操作的方便程度。

（4）合作使用：分析儀價(jià)格昂貴，根據(jù)國內(nèi)目前實(shí)際情況，有些工廠購置了圖像儀而僅僅用作工業(yè)金相分析，閑置的時(shí)間很多，我們從事醫(yī)學(xué)研究的人可以去充分利用它的性能，聯(lián)合進(jìn)行科研工作，發(fā)四川省目前級的圖像分析儀就是在工廠中而不是在高等學(xué)校中。

五、沒有圖像分析儀可否進(jìn)行圖像分析？

當(dāng)沒有圖像分析儀時(shí)，研究者早已想到用網(wǎng)格來進(jìn)行圖像分析，也獲得了客觀的評定結(jié)果。網(wǎng)格可分為兩大類：一類是置于目鏡內(nèi)的網(wǎng)格，可測量切片標(biāo)本上的各種數(shù)據(jù)；另一類是大的網(wǎng)格，可放在照片上，光鏡電鏡照片均可用，對照片上的各種結(jié)構(gòu)可進(jìn)行測量。以上二者至今仍被采用。英國標(biāo)線片公司提供許多型號的市售標(biāo)線片（即網(wǎng)格）。有的國家制造的顯微鏡，將目鏡與帶有六種不同型號標(biāo)線片的旋轉(zhuǎn)盤裝在一起，以便于觀察者作各種測量。國內(nèi)某些單位有自制標(biāo)線片，并有少量出售。

Aalto等1982年曾在“免疫組織化學(xué)的形態(tài)測量法一卵巢腫瘤內(nèi)的胚性癌抗原”一文中推薦用視野評分法，他用三種方法對PAP法免疫組化標(biāo)本進(jìn)行分析：①對全切片的染色進(jìn)行分級。②在10×10放大倍數(shù)下，每一切片用目鏡網(wǎng)格任選25個(gè)方形視場進(jìn)行觀察，并對每一視場進(jìn)行分級。③在25個(gè)視場內(nèi)取25個(gè)點(diǎn)的著色強(qiáng)度進(jìn)行分級。染色強(qiáng)度分為0級、1級（輕度）2級、（中度）、3級（重度）。方法①的結(jié)果不同于②③，而方法②和③差別不大，說明主觀估算的鑒別能力低，一般鏡下觀察不能確切反映染色強(qiáng)度。

用網(wǎng)格進(jìn)行圖像分析的方法很多，如用免疫熒光等方法顯示神經(jīng)纖維，要表示各處的纖維密度不同，除了文字描述如致密、稀疏等以外，用網(wǎng)格法就要客觀一些，在目鏡或照片上放上網(wǎng)格，觀察陽性神經(jīng)纖維與網(wǎng)格上的線條的交叉次數(shù)，排列密集的區(qū)域交叉次數(shù)必然多些，這就比較客觀，重復(fù)性也較好。

用熒光顯微鏡觀察免疫熒光標(biāo)本，Ploem曾在1977年指出熒光強(qiáng)度之差至少要二倍才能在直觀估計(jì)時(shí)顯示出差別，說明人視覺對熒光強(qiáng)度變化不夠敏感。作者在工作中體會到，可利用照相的自動曝光系統(tǒng)來作相對定量，因?yàn)闊晒庥鷱?qiáng)則自動曝光時(shí)間愈短，熒光弱則自動曝光時(shí)間長，相當(dāng)敏感，用眼睛觀察二個(gè)熒光強(qiáng)度幾乎無差別的細(xì)胞，也能在自動曝光時(shí)間上顯示出差別來。作者曾經(jīng)將許多熒光標(biāo)本用相同的曝光時(shí)間拍在同一個(gè)膠卷中，沖洗后，熒光強(qiáng)的區(qū)域膠卷上顯色深，熒光弱的區(qū)域膠卷上顯色淺，因?yàn)闊晒馊菀状銣纾么朔蓪⒛z卷較長期保存，而且膠卷上的信息還可通過圖像分析儀測灰度等數(shù)據(jù)。這些都是在實(shí)踐中的一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)，供讀者參考。

用網(wǎng)格測量的具體操作舉例：圖9-4為一關(guān)聯(lián)方測格，由于測點(diǎn)、測線、測面之間有互相關(guān)聯(lián)的關(guān)系，故稱為關(guān)聯(lián)方測格。方格直線交叉稱為測點(diǎn)，總數(shù)為100個(gè)，方格中所有直線稱為測線，小方格邊長為d如圖中所示，測線總長度為200d,整個(gè)大方格為測面，測面總面積為100d2，測格周圍的虛線不是測線。關(guān)聯(lián)測格的優(yōu)點(diǎn)是：只在計(jì)數(shù)位于欲測圖像中的測點(diǎn)數(shù)P，就可計(jì)算位于該圖像中的測線長度L及測面的面積A。計(jì)算方法為：L=2d·P，A=d2·P。

可將圖9-4攝制于小的透明膠片上，剪成你所用的目鏡筒的內(nèi)徑大小，將其置于目鏡內(nèi)，使測格清晰地疊映組織標(biāo)本的圖像上，則可進(jìn)行測量。d的長度可用臺微尺來確定。也可將9-4復(fù)印在較大的透明膠片上，可用來測量電鏡照片或光鏡照片，將透明膠片疊加在照片上即可進(jìn)行測量。圖9-5為一測量的例子：

圖9－4 關(guān)聯(lián)方測格

圖9-5 示測點(diǎn)計(jì)數(shù)

此關(guān)聯(lián)方測格共有測點(diǎn)100個(gè)（如果只計(jì)數(shù)粗測點(diǎn)則有25個(gè)），圖像為一個(gè)腎小體的輪廓，包括血管球和腎小囊腔，測點(diǎn)計(jì)數(shù)的結(jié)果，在腎小囊腔內(nèi)的測點(diǎn)數(shù)為12，在血管球內(nèi)的測點(diǎn)為49個(gè)，整個(gè)腎小體內(nèi)的測點(diǎn)為12+49=61個(gè)，用臺微尺測出d的長度，則可得到此圖像中腎小囊腔的面積，血管球的面積，腎小體的面積。明小囊腔與腎小體的面積比12：61=19.7%等多個(gè)參數(shù)。

值得提出的是，在顯微鏡下網(wǎng)格的線條有一定寬度，如圖9-6所示。計(jì)數(shù)測點(diǎn)時(shí)如①箭頭所示，即橫線上緣與豎線右緣交點(diǎn)處為真正的測點(diǎn)，若此點(diǎn)落在圖像外面則不能計(jì)數(shù)。如②箭頭所示，此測線的上緣才能作為真正的測線。

圖9-6 示真正的測點(diǎn)與測線

表面積密度的測定：免疫細(xì)胞化學(xué)電鏡照片中的膜性結(jié)構(gòu)如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、細(xì)胞膜等都可測定表面積密度，光鏡標(biāo)本中的各種結(jié)構(gòu)也可同樣測定。表面積密度是指單位體積參照空間內(nèi)特征物的表面積，通過數(shù)學(xué)運(yùn)算可簡便地用以下方法測定：測量單位面積參照面內(nèi)特征物斷面周界線的長度。如果某一個(gè)細(xì)胞的電鏡照片作為參照面，線粒體作為特征物，欲測單位面積電鏡照片內(nèi)線粒體斷面周界線的長度，可用以下公式：

SV=2IL

SV表面積密度2IL交點(diǎn)密度

IL=測線與特征物斷面周界線之間的交叉點(diǎn)數(shù)除以參照面內(nèi)測線總長度。

圖9-7為一咱擺線測格，可用來方便地測表面積密度。圖中的平行直線不是測線，僅是為了便于計(jì)數(shù)交叉點(diǎn)和測點(diǎn)而畫上的。圖中的曲線即擺線，也就是測線，共45條，每條擺線長度d=1/10測格寬度(1cycloid arc =1/10×frame width) ，測格的寬度容易測量，如用目鏡測格，可用臺微尺測量，如用大的透明膠片，可實(shí)際用尺測量，因此每條擺線長度很易算出。測格中共有45條擺線，其總長為45d。圖中直角短線（L）示測點(diǎn)，共90個(gè)，測線長度L與測點(diǎn)數(shù)P的關(guān)聯(lián)關(guān)系為L=d/2·P。具體來說，用圖9-7擺線測格，置于一個(gè)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)照片上，如果整個(gè)測格均位于照片內(nèi)，則參照面內(nèi)測線總長度為45d,如果90個(gè)測點(diǎn)只有60個(gè)落至細(xì)胞內(nèi)（即測格中有30個(gè)測點(diǎn)落在此照片外）則參照面內(nèi)的測線總長度為d/2·P=d/2×60=30d。擺線與特征物（如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、線粒體的膜等）的交叉點(diǎn)容易數(shù)，用上述IL和SV公式即可得出所需參數(shù)。此公式為經(jīng)過數(shù)學(xué)上的研究而得出，我們可應(yīng)用公式來作表面積密度的研究。

讀者需注意的是：若特征物是各向同性分布，可采用任意方向的隨機(jī)切片。若特征物呈各向異性分布，可采用垂直切片或其他一些方法制作的切片。Mattfeldt等曾提出在一個(gè)組織塊中作三個(gè)互相垂直的切片（three mutually perpendiculer sections ）用作研究。目前通用的垂直切片的概念是1986年Baddeley等人提出，指垂直于某任意確定的水平面的隨機(jī)切片，或平行于某一任意確定的垂直軸的隨機(jī)切片。如圖9-8所示，HP為水平面（horizontal plane），VP為垂直面（vertical planes），二個(gè)垂直面互相不是平行關(guān)系，成一定角度。在生物組織中，如皮膚的表皮、各種上皮的外表面均可作為水平面，只要與水平面垂直的各個(gè)方向所切的切片均為垂直切片。骨骼肌纖維的長軸、長骨的長軸均可作為垂直軸，與其平行的切片也作為垂直切片。管狀的器官如消化管、呼吸管道等，可縱向剖開，展平，當(dāng)作水平面，在其中作垂直切片如圖9-9所示：以水平面為基準(zhǔn)，垂直切片必需在隨機(jī)的位置和隨機(jī)的方向，在標(biāo)本計(jì)劃中，步是需要隨機(jī)，常用一組系統(tǒng)隨機(jī)位置的垂直切片（systematic randomly positioned vertical sections），個(gè)切面是隨機(jī)的，其余切面則是與個(gè)切面或一定的角度而選擇的，如圖中（3）和（4）即表示三個(gè)不同的方向，但都垂直于同平面，即垂直切片互相間有一定的旋轉(zhuǎn)角度。圖9-7擺線測格中大箭頭所示vertical 表示箭頭方向與標(biāo)本垂直軸一致，即圖9-8中的verfical 所示方向。

如果有的標(biāo)本沒有可辨認(rèn)的垂直軸，可任意確定一個(gè)水平面，來作垂直切片。

圖9-7 示擺線測格

9-8 示垂直切片

VERTICAL：指垂直軸；

P：水平面；二個(gè)VP為垂直面，互相不呈平行關(guān)系

圖9-9 示管狀器官的垂直切片

六、實(shí)例介紹

因?yàn)閷⒚庖呒?xì)胞化學(xué)方法與圖像分析結(jié)合起來進(jìn)行研究的論文在國內(nèi)國外都還不多。在第六屆學(xué)術(shù)會議上發(fā)表的90多篇論文中只有1篇，因此在實(shí)例介紹中，包括一部分不是免疫細(xì)胞化學(xué)方法，而是用其他組織學(xué)方法與圖像分析結(jié)合起來研究，但這種方法對研究免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本也可借鑒，從中可得到一些啟發(fā)的，也在此選擇性地作一些介紹。

Mcmillan等1983年在第六屆體視學(xué)會議上曾報(bào)告了“用圖像信息處理機(jī)客觀評定免疫組織化學(xué)染色的組織”，闡明了當(dāng)組織與抗體作用時(shí)，不斷攪動血清，明顯提高了免疫反應(yīng)。Bordier 等1982年用圖像分析法對大鼠的神經(jīng)垂體進(jìn)行研究，闡明了軸突占神經(jīng)垂體體積的一半，分泌顆粒占軸突體積的20%，加壓素的含量與分泌顆粒的體積密度無關(guān)，而與分泌顆粒內(nèi)激素濃度有關(guān)。這些結(jié)果如不用圖像分析法是很難得出的。Steward等1983年用測量家雞腦單位面積內(nèi)的突觸數(shù)目等，來研究與記憶形成有關(guān)的細(xì)胞學(xué)改變。

英國現(xiàn)在有300萬75歲以上的人，其中有五十萬人患有老年性癡呆（Alzheimer病），這種病過去認(rèn)為是由于年齡增長的不可避免的現(xiàn)象。英國神經(jīng)科學(xué)所用圖像分析儀與谷氨酸鹽受體的放射自顯影法結(jié)合起來對此病進(jìn)行了重要的研究。由于放射自顯影會產(chǎn)生一些非特異性的結(jié)合，用圖像分析儀可以從全結(jié)合圖像減去非特異性結(jié)合圖像，而得到特異性結(jié)合圖像，可以測出特異性結(jié)合的百分率。目前已知道，老年性癡呆患者腦中，與記憶、理性行為及感情行為有關(guān)的區(qū)域內(nèi)，神經(jīng)元的進(jìn)行性退變，神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生改變，影響了從一個(gè)神經(jīng)元到另一個(gè)神經(jīng)元的信息傳遞。

我國1991年11月出版的“計(jì)量學(xué)在形態(tài)學(xué)研究中應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會論文集“共收集論文123篇，其中有關(guān)免疫細(xì)胞化學(xué)與計(jì)量學(xué)結(jié)合的論文共8篇：①大鼠燙傷后下丘腦室旁核和視上核內(nèi)AVP含量變化的形態(tài)學(xué)計(jì)量（第二軍醫(yī)大學(xué)張忠義等）用圖像分析儀測定AVP陽性反應(yīng)物的面積。②人脊神經(jīng)節(jié) 內(nèi)SP、SK、CGRP免疫反應(yīng)細(xì)胞的比率（中國醫(yī)科大學(xué)方秀斌等），用人工計(jì)數(shù)方法。③交感神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元中ACh和ChAT顯示比較（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院汪家政等），用圖像分析法測定各種參數(shù)。④大鼠脾樹狀突細(xì)胞的組織分布棗S—100蛋白標(biāo)記和立體計(jì)量分析（南京鐵道醫(yī)學(xué)院張錦堃等）用目鏡標(biāo)線片的測格進(jìn)行定量研究。⑤垂體GH腺瘤細(xì)胞分泌顆粒的免疫膠體金定位檢測及定量分析（中國人民總醫(yī)院羅毅等），用圖像分析法測定各種參數(shù)。⑥胃腸粘膜重度異型增生與腺癌細(xì)胞核DNA含量的測定及免疫組化的比較研究（上海第二醫(yī)科大學(xué)吳平平等），用顯微分光光度系統(tǒng)進(jìn)行DNA測量。⑦免疫組化在胃癌病理?xiàng)椛飳W(xué)分型中的價(jià)值（濱州醫(yī)學(xué)院張樹畢等），將免疫組化反應(yīng)分為陽性陰性而進(jìn)行比較。⑧人胎十二指腸EC細(xì)胞的體視學(xué)研究（江西醫(yī)學(xué)院朱清仙等）用目鏡標(biāo)線片測格進(jìn)行定量研究。由此可大致體現(xiàn)我國在此領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀。

七、圖像分析與體視學(xué)

圖像分析還可用于三維重建，用連續(xù)切片可重建立體的原形，在神經(jīng)組織的研究中很適用。我們在顯微鏡下觀察到的是平面圖像，而這些平面圖像是從立體結(jié)構(gòu)中切下來的，單憑平面圖像不能反映組織的真實(shí)結(jié)構(gòu)，例如圓形可以從球形、圓柱形、橢圓形物體中切下。如何從二維結(jié)構(gòu)推導(dǎo)出三維結(jié)構(gòu)，這就是所謂體視學(xué)（stereology）所研究的范疇。stereology 這個(gè)詞是1961年開始正式應(yīng)用的，由于體視學(xué)與圖像分析的密切關(guān)系，無論是上的或國內(nèi)的學(xué)術(shù)會議都將這二者放在一起討論。

將體視學(xué)知識與免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本觀察聯(lián)系起來，將是一種可以獲取更多信息的研究手段，目前國外已很重視體視學(xué)的研究方法，發(fā)表了一些論文，國內(nèi)也開始做這方面的工作，因此有必要將體視學(xué)的一些基本術(shù)語介紹給讀者，供參閱文獻(xiàn)時(shí)或自己進(jìn)行研究時(shí)應(yīng)用。體視學(xué)語言目前已是一種通用的術(shù)語，現(xiàn)將常用的介紹如下：

結(jié)構(gòu)（structure）：在一個(gè)確定的組織模式中，由許多相互依賴的部分所組成的某物體稱為結(jié)構(gòu)。一個(gè)結(jié)構(gòu)至少有二個(gè)組分構(gòu)成，體視學(xué)的目的即弄清楚各組分之間相互關(guān)聯(lián)程度、相對大小等。

組分（component）：在結(jié)構(gòu)中能被截然分開而且能被辨認(rèn)的部分。

相（phase）：所有在本質(zhì)上相同的組分的集合稱為相。例如一個(gè)細(xì)胞的所有線粒體構(gòu)成了此細(xì)胞的線粒體相。

粒子（partiele）：假如組分是由許多離散的并且能夠作為單元獨(dú)立存在的要素所組成，則將這些要素稱為粒子，粒子可以表現(xiàn)為各種形狀。

凸面體（convex solid）：連接此實(shí)體內(nèi)任何兩點(diǎn)的線段，必需全部落于此實(shí)體內(nèi)，換句話說，即此實(shí)體上切下的一個(gè)切片只能形成一個(gè)截面。

包容空間（containing space）：指包含被研究的組分的空間。當(dāng)然，被研究的組分常與其他不被研究的組分并存。

密度（density）：單位體積、單位面積或單位長度內(nèi)的量。

體積密度（volume density）：在單位包容空間內(nèi)，某相的體積。

表面積密度（surface density）：單位包容空間內(nèi)所含有某相的表面積。

長度密度（length density）：單位包容空間內(nèi)某相的長度。

數(shù)密度(numerical density)：單位包容空間內(nèi)某相的數(shù)目。

截面（profile）：任何結(jié)構(gòu)的切片上的圖像。

體視學(xué)的測量值往往是相對測量值，以兩個(gè)彼此相關(guān)聯(lián)的測量值的比率來表達(dá)，其中一個(gè)測量值與組分有關(guān)，另一個(gè)測量值與包容空間在關(guān)，后者也稱為“參考系統(tǒng)”。體視學(xué)原理可確定在切片上測得的這些比率與空間結(jié)構(gòu)內(nèi)相應(yīng)的比率之間的關(guān)系。上述性質(zhì)反映在體視學(xué)符號中，而這些符號目前已普遍被使用，在有些文獻(xiàn)中已不再作解釋了。常用的符號如下：

P測試點(diǎn)數(shù)

P1單位測試線長上的交點(diǎn)數(shù)

Pa單位測試面積上的點(diǎn)數(shù)

Pv單位測試體積上的點(diǎn)數(shù)

L測試線長

L1單位測試線長上的截距

La單位測試面積上線的單元長

Lv單位測試體積上線的單元長

A測試面積

S表面積

Aa單位測試面積上被測物的面積

Sv單位測試體積內(nèi)被測物的表面積

V體積

Vv單位測試體積內(nèi)被測物的體積

N被測物數(shù)目

N1 單位測試線長上與被測物相交的數(shù)

NA單位測試線長上與被測物的數(shù)

Nv單位測試體積內(nèi)被測物的數(shù)

用測試網(wǎng)格的體視學(xué)方法，楊光等，1987年曾對腹腔神經(jīng)節(jié) 小強(qiáng)熒光細(xì)胞進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)的定量分析，測量了線粒體、溶酶體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、顆粒小泡的Vv、Sv、Na、Nv等參數(shù)，得出了標(biāo)準(zhǔn)小強(qiáng)熒光細(xì)胞的計(jì)量值。此處的Vv即單位體積細(xì)胞質(zhì)內(nèi)某種細(xì)胞器的體積，據(jù)體視學(xué)原理，Vv等于切片上被測的某種細(xì)胞器所占的面積的均數(shù)a與細(xì)胞質(zhì)的面積的均數(shù)A之比，如用圖像分析儀即可得出此二者的面積，而用測試格a等于落在此細(xì)胞器上的測試格的交點(diǎn)總數(shù)∑Pi，A等于落在細(xì)胞質(zhì)上的測試格交點(diǎn)總數(shù)∑Pc。

Vv=ā／A=∑Pi/∑Pc

測試格的交點(diǎn)數(shù)有各種規(guī)格，如果有20條橫測試線與20條縱測試線組成的測試網(wǎng)格，則有400個(gè)交點(diǎn)，利用交點(diǎn)所落部位進(jìn)行推算。

免疫組織化學(xué)形態(tài)計(jì)量研究中參照空間的“陷井”問題。在某種組織結(jié)構(gòu)（參照空間）內(nèi)測量特征物的密度值（如體積分?jǐn)?shù)、表面積密度、長度密度、數(shù)目密度等），如果不知道參照空間的體積，得不到值，就有可能作出錯誤的結(jié)論，就是參照空間的“陷井”。舉一例子說明：實(shí)驗(yàn)的結(jié)果對大鼠肝細(xì)胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的體積分?jǐn)?shù)和表面積密度無顯著差異，如果依此就認(rèn)為苯巴妥對肝細(xì)胞（參照空間）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無顯著影響，就錯了，就進(jìn)入了參照空間的“陷井”中去了。實(shí)際上，在些實(shí)驗(yàn)條件下，肝細(xì)胞質(zhì)總體積顯著增加，因而雖然內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的體積分?jǐn)?shù)和表面積密度無顯著差異，但其值已顯著增加了。因此，要測量或估計(jì)參照空間的體積、乘以密度值，獲得值，才能獲正確的結(jié)論。

八、國內(nèi)外生產(chǎn)圖像分析儀的情況簡介

（一）國內(nèi)情況

80年代初，以IBM—PC為代表的個(gè)人計(jì)算機(jī)得到了突飛猛進(jìn)的大發(fā)展和在普及；緊接著各種功能*面向圖像處理與分析的超大規(guī)模（VLSI）蕊片或單板達(dá)到商品化水平，兩者的結(jié)合，為微機(jī)圖像處理系統(tǒng)的問世奠定了硬件基礎(chǔ)。打破了以往只能在大中型計(jì)算機(jī)加圖像處理系統(tǒng)的構(gòu)成價(jià)格昂貴的圖像處理系統(tǒng)的局面。為推廣圖像處理與分析技術(shù)創(chuàng)造了物質(zhì)基礎(chǔ)。從80年代中期開始，國內(nèi)先后有武漢大學(xué)、清華大學(xué)、中科院自動化所、計(jì)算所、重慶大學(xué)、四川大學(xué)、華北計(jì)算所等單位，紛紛進(jìn)行微機(jī)圖像處理與分析系統(tǒng)的研制和推廣應(yīng)用工作。其中以四川大學(xué)計(jì)算機(jī)系圖像圖形研究所研制開發(fā)并定型生產(chǎn)的MIAS系列圖像分析儀在國內(nèi)具有較大的優(yōu)勢，獲得了1992年新產(chǎn)品證書。

現(xiàn)介紹如下：MIAS系列圖像分析儀包括偽彩色型MIAS—300，真彩色型MIAS—400，超高分辨率型MIAS—1000等面向生物醫(yī)學(xué)、金相分析、石油地質(zhì)以及其它目的的各種圖像儀均由硬件系統(tǒng)和軟件系統(tǒng)兩大部分構(gòu)成。硬件系統(tǒng)主要包括MIAS圖像處理計(jì)算機(jī)、圖像輸入設(shè)備，圖像輸出設(shè)備和交互式處理設(shè)備等。其主要性能指標(biāo)：圖像分辨率512×512，640×480，1280×1024。圖像采集速度：電視方式0.04s/幀，慢速高精方式2～10秒/幀。圖像存儲體：MIAS—3000.5MB～1.5MB（兆字節(jié) ），MIAS—4001.5MB～4.5MB,MIAS—1000 2MB～10MB 。灰度等級：256或4096。圖像處理器特性：IPU40MHZ主頻，>10MIPS。IFU（圖像浮點(diǎn)處理器）40MHZ主頻，>4MFOPS（每秒兆浮點(diǎn)處理指令）。在各種圖像輸入設(shè)備中，以視頻攝像機(jī)為圖像的基本輸入設(shè)備，也可以配接視頻錄像機(jī)、數(shù)字掃描儀和連接掃描電鏡的接口。高分辯彩色監(jiān)示器為圖像的基本輸出設(shè)備。該系統(tǒng)還具備有自動移位的載物臺和自動聚集控制系統(tǒng)可供用戶選擇。MIAS系列圖像分析儀的軟件系統(tǒng)是在DOS（磁盤操作系統(tǒng)）3.2以上環(huán)境開發(fā)的，全部采用C語言和匯編語言（80286宏匯編，TMS340系列匯編）進(jìn)行編程，共98個(gè)功能模塊。主要功能包括初始化及環(huán)境設(shè)置、圖像輸入和輸出、圖像編輯、圖像增強(qiáng)、圖像分割、圖像測量、實(shí)用程序等。測量參數(shù)包括一維和二維目標(biāo)的各種形態(tài)參數(shù)，灰度參數(shù)和紋理參數(shù)等數(shù)十種。該系統(tǒng)在長期為華西醫(yī)科大學(xué)、和第四軍醫(yī)大學(xué)、北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、上海醫(yī)科大學(xué)、湖南醫(yī)學(xué)院、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)等數(shù)十個(gè)醫(yī)學(xué)單位的服務(wù)中，積累了許多有效的實(shí)用算法和功能、用戶界面和處理速度方面已達(dá)到和超過某些進(jìn)口中圖像儀的水平。

（二）國外情況

英國的主要生產(chǎn)廠家有劍橋儀器公司（Cambridge Instruments Company），在圖像的測量、計(jì)算、比較、分類等功能上都比過去的產(chǎn)品更*，使用了大功率的新型計(jì)算機(jī)，使用QUIPS程序可獲得各種圖像分析測量的數(shù)據(jù)，重現(xiàn)性好。操作者不必精通程序設(shè)計(jì)語言，只需接受幾小時(shí)使用QUIPS語言的教學(xué)訓(xùn)練即可。

英國Ealing—Beck公司生產(chǎn)Histotrak圖像分析系統(tǒng)，如用透射光，該儀器能自動改變放大倍數(shù)。具有陰影校正系統(tǒng)。使研究工作者感興趣的是該儀器中設(shè)有坐標(biāo)發(fā)生器，能使被檢圖像的坐標(biāo)數(shù)據(jù)通過臺式計(jì)算機(jī)在輸出打印機(jī)上打印出來。

英國Micro Measurements 公司生產(chǎn)電視掃描圖像分析儀，成本較低，用途較多。

英國Joycez—Loebl公司生產(chǎn)Magiscam圖像分析系統(tǒng)，操作較簡單，可解決一般圖像分析問題，并可進(jìn)行彩色圖像分析，在醫(yī)學(xué)和放射學(xué)等方面適用。

美國的主要廠家有美國美敦設(shè)備公司（Milton Roy Company），生產(chǎn)OMNICON圖像分析儀，據(jù)上海多國儀器儀表展覽會資料介紹，Ommicon圖像分析系統(tǒng)有Omnicon Alpha500用于常規(guī)檢驗(yàn)和研究。Ommicon FAS—III 用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域較合適。Omnicon 3500為一種多用途的系統(tǒng)，配有64K通用NOVA4×計(jì)算機(jī)。Omnicon 5000是該公司發(fā)展的使用起來方便的定量圖像分析儀。Omnicon 7500是為了對圖像作實(shí)時(shí)分析而設(shè)計(jì)的產(chǎn)品。

德國Leitz公司制造Leitz T.A.S圖像分析儀，圖像輸入裝置是一臺Leitz Orthplan顯微鏡，該儀器還包括一臺TU—58雙盒式磁帶機(jī)，可用于存貯程序、數(shù)據(jù)、圖像。該公司產(chǎn)品的新型號是Leitz T.A.S PLUS，增加了自動調(diào)焦、自動圖像旋轉(zhuǎn)等功能。

德國Carl Zeiss公司的產(chǎn)品是Micro—Videomat，主要優(yōu)點(diǎn)是有適用于計(jì)算機(jī)和大型計(jì)算機(jī)的程序。型號有Micro Videomat 2型、3型等。

德國的OPTON公司生產(chǎn)IBAS2000圖像分析系統(tǒng)，可應(yīng)用于顯微圖像分析的所有領(lǐng)域，如放射自顯影、染色體分析、真色圖像信息、細(xì)胞學(xué)分析、用連續(xù)切片來重建原形、顆粒大小分析、纖維分析、可測定交叉的或重疊的纖維長度及纖維的長/寬比例等。

德國VEB Zeiss Jena公司生產(chǎn)EPIQUANT圖像分析儀，可進(jìn)行自動或半自動分析。

日本浜板電視公司生產(chǎn)一系列特殊用途的、測量特殊參數(shù)的自動分析系統(tǒng)，如其中有一種稱為Multianalyser的，與顯微鏡相結(jié)合，可用來測面積、長度等。

對國內(nèi)外資料收集比較局限，總之購置儀器時(shí)要充分了解性能、對價(jià)格作比較、才能獲得滿意的結(jié)果。

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