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瀏覽次數(shù)固相多肽合成就是不斷地在固相載體上加入α-氨基和側(cè)鏈基團被保護的氨基酸。FMOC基團是用來保護α-氨基中的N的，去除保護基團后，再加入第二個氨基酸。產(chǎn)生的多肽通過一個連接臂將C端連接在樹脂上，它可以被裂解下來。通常情況下，在多肽從樹脂上裂解下來的同時去除側(cè)鏈保護基團，一般采用哌啶去 FMOC保護基團，肽樹脂的裂解和側(cè)鏈保護基團去除一般用強酸，比如三，N,N-二甲基甲酰胺（DMF）是樹脂去保護、氨基酸反應和洗滌的溶劑。
1. 合成步驟：
| 步驟 | 溶液或溶劑 | 循環(huán)數(shù) | 時間 | ||||
| 1 | DMF | 2次 | 30s | ||||
| 2 | 含20%哌啶DMF溶液 | 1次 | 5min | ||||
| 3 | DMF | 1次 | 30s | ||||
| 4 | 含20%哌啶DMF溶液 | 1次 | 10min | ||||
| 5 | DMF | 6次 | 30s | ||||
| 6 |
| 1次 | 30-60min | ||||
| 7 | DMF | 2次 | 30s |
HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
HOBt: N-Hydroxybnzotrizole•H2O
NMM: N-methylmorpholine
| 2． 從樹脂上分離下來： | |||||||||||||||||||||||||||||||||
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試劑K：TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5（v/v） 3. 純化： RP-HPLC純化 ① HPLC條件： 流動相：A）0.1%TFA水溶液 B）0.1%TFA乙腈溶液 梯度：A/ B（90/ 40）到A/ B（40/ 90）30min 流速：1ml/min 溫度：室溫（23℃） 檢測：214nm的紫外 樣品：凍干的粗品 ② 步驟： a. 將粗品溶解在流動相中 b. 注入20-30mg（2-2.5ml）樣品 c. 將主峰收集到50ml管中 d. 凍干 4. 鑒定： LC/MS條件： 流動相：A）0.05%TFA水溶液 B）0.1%TFA乙腈溶液 梯度：A/ B（90/ 10）到A/ B（40/ 60）15min 流速：1ml/min 溫度：室溫（23℃） 檢測：214nm的紫外 MS API:ESI |
