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產品簡介
| 供貨周期 | 一周 | 貨號 | YS2096C |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 科研實驗 |
產品介紹
EBV-轉化人淋巴細胞EBV（STR）培養條件
培養條件 | 空氣，95%；CO2，5% ；37℃ | ||
生長特性 | 詳見説明 | 凍存條件 | 無血清凍存液 |
| 背景 | 更新中。。。 | ||
傳代方法 | 1:2~1:3 | 傳代情況 | 2天換液 |
備注 | 傳5-8代使用嘌呤霉素（1-4ug/ml）篩選鞏固一下 本庫的細胞僅用于科研工作，未經許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 | ||
二、收貨后處理
復蘇細胞處理方法：培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，嚴格無菌后將細胞瓶放置培養箱中靜置2-4小時以穩定細胞狀態。靜置后顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。
凍存細胞處理方法：收到細胞后，觀察泡沫箱中干冰是否有剩余，凍存管是否完好無損是否有解凍情況，若發現干冰汽化或凍存管有解凍破損現象，請及時拍照并與我們聯系。如果細胞簽收三天內未與我們聯系，則默認為收貨良好。復蘇第一管如有活性問題，請及時聯系我們，技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管，未與我方聯系擅自復蘇第二管出現問題不予售后。
細胞培養步驟
a、細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養液收集至離心管中，留5ml培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養。
貼壁細胞步驟如下：
1) 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；
2) 加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置培養箱中消化 1min ，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后，加6ml含10%血清的培養基終止消化；
3) 輕輕吹打細胞，脫落后吸出至離心管中，1000 rpm離心5-8min，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻；
4) 按5-6mL每瓶補加培養基，將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 mL培養基的6cm培養皿中或者T25培養瓶中。
（即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養皿）
懸浮細胞傳代步驟如下：
1、半換液法
半換液處理，豎著培養瓶在培養箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養基，然后補給3ml的培養基，如果培養基變色慢，可直接加500ul左右FBS，傳代的時候可以直接補給5ml培養基 分兩個培養瓶培養，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞。
2、離心換液法
如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
b、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上再轉入液氮罐中。
C、細胞復蘇：
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；
4、第二天，換用新鮮培養基繼續培養。
注意事項：有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發生細胞脫落，這是正常現象。如脫離較多可將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養（后期對比培養），沉淀加入1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
歡迎新老客戶咨詢訂購：EBV-轉化人淋巴細胞EBV（STR）
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