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產品描述

Cyanine3（Cy3），是花青素熒光素染料家族的成員之一，是化學合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以兩種異構體的形式供貨，一種是非磺化花青素（non-sulfonated cyanines），一種是磺化花青素（sulfonated cyanine）。兩者的光譜性質幾乎一致，因此大部分應用可相互替換，比如，都可用于標記DNA或蛋白等生物分子。兩者的主要區別在于：磺化染料是水溶性的，在水相的標記反應體系內不需要使用有機共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性，增強標記效率。

本Cyanine 3（Cy3）是以磺化染料的形式供貨，易溶于水，Ex=555 nm，Em=565 nm，具有明亮熒光，光穩定性強，pH非敏感性等優點，適用于標記多肽、蛋白以及核酸等生物分子，以通過后續熒光成像以及其他熒光生物學方法分析目的蛋白。

本Cy3 NHS ester，即含N-羥基琥珀酰亞胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基團的Cy3，可直接與生化分子上的氨基（-NH₂）反應形成穩定的酰胺鍵，主要是伯胺。

產品簡介：

英文別名（English Synonym）	Cyanine 3, monosuccinimidyl ester
分子量（Molecular Weight）	829.03
外觀（Appearance）	紫色固體
Ex/Em	555nm/565nm
溶解性（Solubility）	溶于DMSO，DMF，水
結構式（Structure）

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

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運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃干燥避光保存，有效期1年。

注意事項

1）NHS ester基團對濕度非常敏感，務必干燥保存產品。使用前產品需放到室溫回溫至少20min。

2）NHS ester基團的水解發生在水溶性緩沖體系屬于競爭性反應。對蛋白/多肽（濃度：1-1mg/ml）伯胺的連接反應建議在pH 7-9范圍內進行。使用不含氨基的緩沖體系，pH 7-9。比如100 mM 磷酸鈉，150 mM 氯化鈉， pH 7.5； 100mM Hepes, pH 7.5。100 mM 碳酸鈉/碳酸氫鈉, pH 8-9；或100mM 硼酸緩沖液, pH 8-9。

3）不要使用含伯胺的任何緩沖液，比如Tris，甘氨酸。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

使用方法（用Cy3-NHS Ester 標記抗體）

【注意】：可參考本方法進行多肽，蛋白或者其他分子的標記，需要根據具體的實驗體系對合適的標記緩沖體系，樣本濃度，染料濃度等參數做出合適的調整。

1）用不含氨基的合適的緩沖液（eg.100mM磷酸鈉，150mM NaCl, pH7.5）溶解抗體使其濃度達到1-5mg/ml。【注】：如抗體中有殘留Tris或 glycine 污染，則需透析或者脫鹽到合適的緩沖液內。

2）使用前，用適量去離子水或者無水DMSO溶解Cy3-NHS，使其摩爾濃度為抗體摩爾濃度的400倍，例如，待標記的IgG濃度為1mg/ml（eg 6.7?M），則溶解后Cy3-NHS的濃度為2.7mM；如待標記的IgG濃度為2.5mg/ml，則溶解后Cy3-NHS的濃度為6.75mM；

3）向抗體中加入適量Cy3-NHS試劑，以達到預期的標記效率。【注】：當用Cy 3 NHS ester標記抗體或其他蛋白，亮度的偶聯物其染料/蛋白的比率為4-12，取決于特定的應用。過高比率會增加非特異性背景，喪失抗體特異性結合，導致聚集。建議根據應用優化標記比率。

4）室溫孵育60min（或更長）；

5）利用合適緩沖液透析或脫鹽柱去除未反應的試劑；

6）分別在280nm和550nm檢測Cy3-抗體的吸光值；

7）測定Cy3標記效率（DOL）和標記濃度。見下公式。

公式一. 利用下面公式計算Cy3標記效率（DOL）及其濃度（mg/ml）

Eq.1  Number of Cy3 dye per protein=molarity Cy3 dye / molarity protein

Eq.2  [Molarity of Cy3 dye]=A555/ε555

Eq.3  [Molarity of protein]=A280C/ε280

Eq.4  mg/ml=[A280-(A555×0.08)/(E1%/10)]×dilution factor

【注】上述參數如下： A555=conjugate absorbance at 555±2nm ε555=molarextinction coefficient Cys dye =150000M-1cm-1 A280= conjugate absorbance at 280nm A280C =corrected conjugate absorbance at 280nm= A280-( A555×0.08) ε280= molarextinction coefficient protein(M-1cm-1)=MWp×E1%/10

應用舉例：

用高于抗體摩爾濃度20倍的Cy3-NHS標記 0.1 ml山羊IgG（濃度為1mg/ml）。標記后脫鹽去除未標記染料，在PBS中測定(1:5稀釋)測定其A₂₈₀和A₅₅₅:

A₂₈₀=0.2906 

A₅₅₅=0.9825

另：山羊IgG分子量為150kDa, E_1%=13.6 or 204000M^-1cm^-1

計算DOL如下：

By Equation 2      Molarity of Cy3 dye=0.9825/150000 M^-1cm^-1=6.55?M

By Equation 3      Molarity of IgG =0.2906-(0.9825×0.08)/204000 M^-1cm^-1=1.039?M

By Equation 1      number of Cy3 per IgG=6.55?M/1.039?M=6.3

則計算Cy3-IgG protein 濃度為（mg/ml）：

By Equation 4     mg/ml=[0.2906-(0.9825×0.08)/1.36]×5=0.78mg/ml

Cy3 NHS酯：

Cy3 NHS酯是標記生物分子氨基的活性染料，此試劑可標記溶解蛋白，多肽和寡核苷酸/DNA。對于比較敏感的蛋白請選擇無需任何共溶劑的，可溶于水的磺酸基-Cy3 NHS酯。

分子結構： 

一般性質： 
外觀：紅色粉末
分子量：590.15 
質譜分析M+增量：474.2
分子式：C₃₄H₄₀ClN₃O₄
溶解性：溶于有機溶劑（DMF,DMSO,二氯甲烷），不溶于水
質控：NMR 1H（95%）和13C,TLC,功能測試

光譜性質： 
激發波長：555nm
在激發波長下的消光系數：150000Lmol^-1cm^-1
發射波長：570nm
熒光量子產率：0.31

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Cy5 NHS酯：

Cy5在生命科學研究和診斷領域是非常常用的熒光團。此熒光團在紅色區域有發射，許多CCD檢測器有靈敏度。 
Cy5 NHS酯是標記多肽，蛋白和寡核苷酸的活性染料。染料需要少量的有機共溶劑（比如DMF和DMSO）溶解后進行標記反應。此試劑可以標記溶解蛋白和各種多肽，寡核苷酸的氨基。對于易降解的蛋白，不可使用DMF或DMSO，應選擇我們的不需任何共溶劑的sulfo-Cy5 NHS酯，兩者具有非常相似的熒光特性。

分子結構：

一般性質： 
外觀：暗藍色粉末
分子量：616.19
分子式：C₃₆H₄₂ClN₃O₄
溶解性：易溶于有機溶劑（DMF,DMSO和氯化物），難溶于水
質控：NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能測試

光譜性質： 
激發波長：646nm
在激發波長下的消光系數：250000 mol^-1cm^-1
發射波長：662nm
熒光量子產率：0.2

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Cy 3.5 NHS酯：

Cy3.5 NHS酯是標記多肽，蛋白和寡核苷酸的活性染料 
Cy3.5 NHS酯可替代Alexa Fluor 594,DyLight 594的NHS酯

分子結構： 

 
一般性質： 
外觀：暗紫色粉末
分子量：732.35
分子式：C₄₅H₅₀ClN₃O₄
溶解性：溶于有機溶劑（DMF,DMSO，二氯甲烷），不溶于水
質控:NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能測試

光譜性質： 
激發波長：591nm
在激發波長下的消光系數：116000Lmol^-1cm^-1
熒光量子產率：0.35

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Cy 5.5 NHS酯：

Cy5.5 NHS酯標記多肽，蛋白和寡核苷酸的氨基 
Cy5.5 NHS ester：是近紅外染料，除了用于標記多肽，蛋白和寡核苷酸氨基的活性染料，可用于后續的小動物活體成像實驗。 
染料可代替Alexa Fluor 680 NHS ester和DyLight 680 NHS ester

分子結構： 

一般性質： 
外觀：深藍色粉末
分子量：716.31
分子式：C₄₄H₄₆ClN₃O₄
溶解性：溶于有機溶劑（DMSO,DMF,二氯甲烷），在水中不易溶解
質控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試

光譜性質： 
激發波長：673nm
在激發波長下的消光系數：209000Lmol^-1cm^-1
發射波長：707nm
熒光量子產率：0.2

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

ROX NHS酯，純6-異構體：

ROX（羅丹明X又叫R101）是具有多種用途的高熒光性，不感光的羅丹明染料。ROX標記的寡核苷酸探針經常被用于qPCR及具有ROX通道的qPCR設備(http://www.chemdrug。。ｃｏｍ/sell/22/)
標記多肽，蛋白和氨基-寡核苷酸的活性染料，此染料可代替Alexa Fluor 568

分子結構：

一般性質： 
外觀：深紅色粉末
分子量：631.67
質譜分析M+增量：516.2
分子式：C₃₇H₃₃N₃O₇
CAS號：117491-83-5
溶解性：易溶于有機溶劑（DMF,DMSO），略溶于水
質控：NMR 1H（95%）和13C,TLC,功能測試

光譜性質： 
激發波長：570nm
激發波長下的消光系數：82000Lmol^-1cm^-1
發射波長：591nm
熒光量子產率：1.0

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Cy7 NHS 酯：

氨基活性Cy7,近紅外染料。此試劑可被用于產生Cy7-標記的生物分子，用于后續的小動物活體成像研究，藥物(http://www.chemdrug。。ｃｏｍ/)設計及相關實驗。Cy7中心加強聚亞甲基鏈的結構特點，與母結構相比其量子產率提高了20%，增加了其熒光亮度。

分子結構：

一般性質： 
外觀：綠色粉末
分子量：682.29
分子式：C₄₁H₄₈ClN₃O₄
溶解性：溶于有機溶劑（DMSO,DMF,二氯甲烷），不易溶于水
質控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試

光譜性質： 
激發波長：750nm
在激發波長下的消光系數：199000Lmol^-1cm^-1
發射波長：773nm
熒光量子產率：0.3

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Cy7.5 NHS 酯：

Cy7.5是近紅外染料，具有長的發射波長，近紅外照射容易穿透組織，可用于小動物活體成像實驗。Cy7.5中心加強聚亞甲基鏈的結構特點，與母結構相比其量子產率提高了20%，增加了其熒光亮度。

分子結構：

 
一般性質： 
外觀：綠色粉末
分子量：782.41 
分子式：C₄₉H₅₂ClN₃O₄
溶解性：溶于有機溶劑（DMSO,DMF,二氯甲烷），不易溶于水
質控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試

光譜性質： 
激發波長：788nm
在激發波長下的消光系數：223000Lmol^-1cm^-1
發射波長：808nm
熒光量子產率：0.3

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Sulfo-Cy3 NHS酯：

此染料可溶于水，氨基活性Cy3染料。在水溶液中有效標記蛋白和多肽，無需共溶劑，是低溶解性蛋白和易于降解蛋白的理想選擇。
此染料是磺化，親水性染料。可以代替Alexa Fluor 546和DyLight 549

分子結構：

一般性質： 
外觀：深紅色晶體
分子量：735.8
分子式：C₃₄H₃₈N₃NaO₁₀S₂
溶解性：極易溶于水，易溶于有機溶劑（DMF,DMSO）
質控：NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能性測試

光譜性質： 
激發波長：548nm
激發波長下的消光系數：162000Lmol^-1cm^-1
發射波長：563nm
熒光量子產率：0.1

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Sulfo-Cy5 NHS酯：

水溶性Cy5 NHS酯，用于標記生物分子的氨基，無需任何共溶劑，因此可以用于標記在有機溶劑中易降解的蛋白和溶解性低的蛋白 
Cy5 是***常用的熒光團之一，與多種設備兼容，比如平板讀數儀，顯微鏡和成像儀 
此染料是高水溶性，可以代替多種用途的Alexa Fluor 647,DyLight 649

分子結構：

 
一般性質：
外觀：深藍色粉末
分子量：761,84
分子式：C₃₆H₄₀N₃NaO₁₀S₂
溶解性：極易溶于水，易溶于有機溶劑DMF和DMSO
質量控制：NMR 1H （95%）和13C,TLC,功能性測試

光譜性質： 
激發波長：646nm 
激發波長下的消光系數：271000Lmol^-1cm^-1 
發射波長：662nm
熒光量子產率：0.2

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

 

Sulfo-Cy7 NHS ester：

一般性質： 
外觀：深綠色粉末
分子量：827.94
分子式：C₄₁H₄₆N₃NaO₁₀S₂
溶解性：易溶于水,DMF,DMSO
質控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試

光譜性質：
激發波長：740nm 
在激發波長下的消光系數：240600Lmol^-1cm^-1 
發射波長：773nm

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司