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Streptavidin, CF594 conjugate可用于檢測生物素標記的DNA或RNA探針
閱讀:61 發布時間:2025-9-26熒光特性:
激發波長:594 nm
發射波長:614 nm
熒光顏色:橙紅色
量子產率:CF594具有高量子產率,比其他類似染料(如Alexa Fluor 594)更明亮。
光穩定性:CF594具有良好的耐光性,可用于共聚焦顯微鏡和單分子成像。
化學性質:
鏈霉親和素(Streptavidin):一種從鏈霉菌(Streptomyces avidinii)中提取的蛋白質,具有良好的生物素(Biotin)結合能力,其與生物素的結合是生物化學中的非共價相互作用之一,解離常數(Kd)約為10?1? M。
CF594:一種熒光染料,具有良好的光穩定性和水溶性,激發波長為594 nm,發射波長為614 nm,熒光顏色為橙紅色。
分子結構:
鏈霉親和素是一個四聚體蛋白,每個亞基可以結合一個生物素分子。
CF594通過化學方法與鏈霉親和素的賴氨酸殘基共價結合,形成穩定的偶聯物。
基本參數:
中文名:CF594-鏈霉親和素偶聯物
英文名:Streptavidin, CF594 conjugate
規格標準:1mg、5mg、10mg
試劑廠家:陜西新研博美生物科技有限公司
相關應用:
免疫熒光(IF/ICC):
作為二抗使用,用于檢測生物素標記的一抗。
例如,在細胞免疫熒光實驗中,使用生物素標記的二抗與一抗結合,然后加入鏈霉親和素-CF594偶聯物進行熒光標記。
熒光原位雜交(FISH):
檢測生物素標記的DNA或RNA探針。
例如,在FISH實驗中,使用生物素標記的核酸探針與目標核酸序列結合,然后加入鏈霉親和素-CF594偶聯物進行熒光標記。
Western Blotting:
作為檢測試劑,與生物素標記的二抗一起使用,對膜上的蛋白條帶進行熒光檢測。
例如,在Western Blot實驗中,使用生物素標記的二抗與目標蛋白結合,然后加入鏈霉親和素-CF594偶聯物進行熒光檢測。
流式細胞術(Flow Cytometry):
檢測細胞表面或胞內生物素標記的抗體。
例如,在流式細胞術實驗中,使用生物素標記的抗體與細胞表面抗原結合,然后加入鏈霉親和素-CF594偶聯物進行熒光標記。
酶聯免疫吸附測定(ELISA):
用作熒光檢測階段的試劑。
例如,在ELISA實驗中,使用生物素標記的二抗與目標蛋白結合,然后加入鏈霉親和素-CF594偶聯物進行熒光檢測。
相關優勢:
高親和力:鏈霉親和素與生物素的結合是生物化學中的非共價相互作用之一,解離常數(Kd)約為10?1? M。
高信號強度:CF594染料具有高量子產率和出色的水溶性,比其他類似染料(如Alexa Fluor 594)更明亮。
光穩定性:CF594具有優良的耐光性,非常適合高要求的應用,如共聚焦顯微鏡和單分子成像。
特異性高:鏈霉親和素對生物素的特異性結合能力良好,背景信號低。
應用廣泛:適用于多種生物化學和細胞生物學實驗,如免疫熒光、熒光原位雜交、Western Blot、流式細胞術和ELISA等。
使用方法:
生物素標記:
首先將目標分子(如抗體、核酸探針等)用生物素標記。生物素標記的方法包括但不限于NHS酯活化生物素、生物素酰肼等。
例如,使用NHS酯活化生物素標記抗體:
將抗體溶于無碳酸鹽的磷酸鹽緩沖液(PBS)中。
按照生物素與抗體的比例(通常為1:1到10:1)加入NHS酯活化生物素。
室溫反應30分鐘,然后用透析或凝膠過濾純化標記后的抗體。
特異性結合:
將生物素標記的分子與樣本孵育,使其特異性結合到目標上。
例如,在免疫熒光實驗中,將生物素標記的抗體與細胞或組織切片孵育,使其結合到目標抗原上。
加入鏈霉親和素-CF594偶聯物:
洗去未結合的探針后,加入鏈霉親和素-CF594偶聯物。
鏈霉親和素會與生物素強力結合,形成穩定的復合物。
例如,在免疫熒光實驗中,加入鏈霉親和素-CF594偶聯物,室溫孵育30分鐘,然后用PBS清洗3次。
成像:
使用適當的顯微鏡或成像系統觀察,在594 nm附近的橙紅色熒光處即可看到目標物的位置和分布。
例如,使用共聚焦顯微鏡觀察細胞或組織切片,設置激發波長為594 nm,發射波長為614 nm。
包裝:

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