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Alexa Fluor 405 NHS（AF405 NHS）是一種藍色熒光標記試劑
閱讀：52 發布時間：2025-11-21Alexa Fluor 405 NHS 酯是一種結合了 Alexa Fluor 405 熒光染料與 NHS 酯活化基團的化合物，主要用于生物分子的熒光標記。以下是對其特性與應用的詳細介紹：
化學性質：
熒光性能
激發/發射波長：激發峰為 401 nm，發射峰為 421-423 nm，與 405 nm 紫激光匹配，適用于熒光顯微鏡、流式細胞儀等設備。
光穩定性：相較于傳統熒光染料，Alexa Fluor 405 具有更高的光穩定性，成像過程中信號衰減更慢，適合長時間觀察。
pH 穩定性：在 pH 4-10 范圍內熒光強度穩定，兼容多種生物實驗條件。
化學特性
NHS 酯基團：N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS ester）可與生物分子中的伯胺（-NH?）反應，形成穩定的酰胺鍵，實現高效標記。
基本參數：
中文名：AF405琥珀酰亞胺酯，AF405活性酯
英文名：AF405 NHS，Alexa Fluor 405 NHS
分子式：C46H71N5O15S3
分子量：1030.3
外觀：淡黃色固體
規格標準：1mg、5mg、10mg
試劑廠家：陜西新研博美生物科技有限公司
相關優勢：
高效標記：NHS 酯與伯胺的高反應性確?？焖佟⑻禺愋越Y合。
優異熒光性能：高亮度、高光穩定性與低 pH 敏感性，適應多樣實驗條件。
廣泛應用：兼容蛋白質、核酸、多肽等多種生物分子，支持細胞成像、流式分析、免疫檢測等多場景應用。
靈活組合：可與其他熒光染料聯用，實現多重標記與復雜生物過程解析。
使用方法：
溶解與稀釋
將 Alexa Fluor 405 NHS 酯溶解于無水 DMF 或 DMSO 中，配制成高濃度儲備液（如 10 mM）。
用碳酸氫鈉緩沖液（pH 8.3）稀釋至工作濃度（通常 1-10 μM），避免高濃度導致自淬滅。
標記反應
反應條件：在 0.1-0.2 M 碳酸氫鈉緩沖液（pH 8.3）中，室溫反應 1 小時，或 4°C 過夜以提高標記效率。
終止反應：加入 Tris 緩沖液（pH 7.5）淬滅未反應的 NHS 酯，或通過純化柱去除多余染料。
純化與鑒定
使用高效液相色譜（HPLC）或凝膠過濾柱純化標記產物，去除未結合的染料和副產物。
通過 SDS-PAGE 或質譜驗證標記效率與分子量變化。
相關應用：
生物分子標記
蛋白質標記：通過與蛋白質表面的賴氨酸殘基反應，標記抗體、酶等，用于免疫檢測（如 ELISA、Western blot）和細胞成像。
核酸標記：可標記胺修飾的寡核苷酸，用于熒光原位雜交（FISH）或核酸定量分析。
多肽與藥物載體：標記多肽或納米顆粒，追蹤其在細胞內的分布與動態變化。
細胞成像與分析
熒光顯微鏡：觀察細胞內特定分子的定位，如細胞骨架、膜蛋白或信號分子。
流式細胞術：標記細胞表面抗原，實現多參數細胞分選與分析。
多重標記：與其他熒光染料（如 Alexa Fluor 488、555）組合使用，同時檢測多個靶標，揭示分子間相互作用。
高靈敏度檢測
低背景噪聲：Alexa Fluor 405 的高量子產率（消光系數達 35,000 L·mol?1·cm?1）確保信號強度，提升檢測靈敏度。
穩定信號輸出：在成像或流式分析中，減少熒光淬滅對結果的影響，提高數據可靠性。
結構式：
相關試劑產品：
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