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AF488 Human Transferrin可作為競爭性示蹤探針用于載體靶向能力評估
閱讀:17 發(fā)布時間:2026-7-17一、技術參數(shù)
中文名:AF488標記人轉鐵蛋白
英文名:AF488 Human Transferrin,Alexa Fluor488 Human Transferrin,Human Transferrin,Alexa Fluor 488 labeled,Human Transferrin-AF488
溶解性:凍干粉可用去離子水復溶,工作液于使用當天配制
外觀性狀:凍干粉固體(Freeze-dried solid)
熒光特性:Ex/Em ≈ 495/519 nm
激光激發(fā):488 nm藍光激光
實驗室:陜西新研博美生物科技有限公司
規(guī)格:10mg,25mg,50mg
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二、試劑定義與結構組成
AF488-Human Transferrin(AF488標記人轉鐵蛋白)是將高亮度綠色熒光染料Alexa Fluor 488與Transferrin通過共價偶聯(lián)形成的熒光探針,廣泛應用于受體介導內吞研究、鐵代謝分析、活細胞成像及流式細胞術等科研領域。
從化學結構與組成層面來看,AF488-Human Transferrin的核心骨架由人轉鐵蛋白與Alexa Fluor 488熒光團兩部分構成:
人轉鐵蛋白部分:人轉鐵蛋白(Human Serum Transferrin)是鐵離子轉運蛋白,是一種單體血清糖蛋白。其分子結構由兩個同源的葉狀結構域組成,每個葉片含有一個高親和力可逆鐵離子結合位點,每個轉鐵蛋白分子可攜帶2個三價鐵離子(Fe3+) 。
Alexa Fluor 488熒光團部分:AF488是一種磺化的羅丹明類綠色熒光染料,激發(fā)峰約為495 nm,發(fā)射峰約為519 nm。具有高量子產(chǎn)率(約0.92)、高光穩(wěn)定性和優(yōu)異的水溶性。AF488通過NHS酯活化形式與轉鐵蛋白表面的伯氨基(主要為賴氨酸殘基的ε-氨基)發(fā)生反應,形成穩(wěn)定的酰胺共價鍵。標記后的轉鐵蛋白保留了鐵離子結合能力和受體識別能力。
三、產(chǎn)品特性
1. 熒光性能優(yōu)異:Alexa Fluor 488是一種明亮、光穩(wěn)定性優(yōu)異的綠色熒光染料,激發(fā)峰約495 nm,發(fā)射峰約519 nm。具有高量子產(chǎn)率和高光穩(wěn)定性,在長時間成像和流式細胞分析中信號穩(wěn)定可靠。
2. 轉鐵蛋白天然活性保持:AF488標記過程采用溫和的偶聯(lián)條件,不影響轉鐵蛋白的鐵離子結合能力和受體識別能力。標記后的轉鐵蛋白(Holo-Transferrin,鐵結合形式)仍能特異性結合細胞膜上的轉鐵蛋白受體(TfR),經(jīng)受體介導的內吞作用進入細胞。
3. 鐵離子pH響應性釋放:轉鐵蛋白在生理pH 7.4條件下高效結合鐵離子。攜帶鐵的轉鐵蛋白進入核內體后,酸性環(huán)境(pH ~5.5) 促使鐵離子從轉鐵蛋白-受體復合物上解離。鐵離子釋放后,脫鐵轉鐵蛋白(Apo-Transferrin) 被循環(huán)至質膜,從受體上釋放以繼續(xù)清除更多鐵離子。
4. 胞內轉運途徑示蹤能力:熒光轉鐵蛋白偶聯(lián)物可與熒光LDL聯(lián)合使用,區(qū)分溶酶體靶向途徑和循環(huán)內體途徑。
5. 多色兼容性優(yōu)異:AF488的綠色發(fā)射光譜(~519 nm)與紅色(如AF594、Cy3)及遠紅光(如AF647、Cy5)等熒光染料光譜重疊極小,適合構建多通道共標實驗體系。
6. 應用范圍廣泛:AF488標記的轉鐵蛋白已廣泛應用于共聚焦顯微鏡、流式細胞術、FRET成像、Western Blot、免疫細胞化學/免疫熒光(ICC/IF) 等多種實驗平臺。
四、相關應用
應用一:受體介導內吞(RME)途徑研究
核心原理:轉鐵蛋白通過與細胞膜上的轉鐵蛋白受體(TfR/CD71)特異性結合,經(jīng)網(wǎng)格蛋白包被凹陷內化進入細胞。AF488-Transferrin的綠色熒光信號可實時追蹤這一過程的每一個步驟——從轉鐵蛋白與TfR在細胞膜表面的結合,到內吞小泡的形成、核內體的酸化及鐵離子的釋放。
應用二:轉鐵蛋白受體(TfR)循環(huán)與回收途徑研究
核心原理:鐵離子在核內體酸性環(huán)境中釋放后,脫鐵轉鐵蛋白(Apo-Transferrin)-受體復合物被循環(huán)至細胞膜。在中性pH條件下,脫鐵轉鐵蛋白從受體上解離,重新進入循環(huán)清除更多鐵離子。AF488-Transferrin可通過脈沖-追蹤實驗研究這一循環(huán)過程——細胞先與AF488-Transferrin孵育使其被攝取(脈沖),然后加入過量未標記轉鐵蛋白以刺激轉鐵蛋白受體的循環(huán)和熒光轉鐵蛋白的釋放。
應用三:活細胞共聚焦顯微鏡與動態(tài)成像
核心原理:AF488-Transferrin的綠色熒光信號明亮穩(wěn)定,適合活細胞共聚焦激光掃描顯微鏡下的實時動態(tài)觀察。通過活細胞成像,可觀察轉鐵蛋白受體在活細胞中的運輸動態(tài),研究內吞、胞內運輸和受體循環(huán)的實時過程。AF488的優(yōu)異光穩(wěn)定性支持長時間成像,避免光漂白對動態(tài)觀察的干擾。
應用四:FRET(熒光共振能量轉移)成像
核心原理:AF488可作為FRET體系中的能量供體,與合適的能量受體(如AF594、Cy3等)配對使用。AF488-Transferrin的發(fā)射光譜(~519 nm)與多種紅色熒光染料(如AF594的激發(fā)峰~590 nm)具有良好的光譜重疊,滿足FRET能量轉移條件。通過FRET成像可實時監(jiān)測轉鐵蛋白受體在細胞內外的構象變化、二聚化狀態(tài)及配體-受體相互作用動力學。
應用五:流式細胞術(Flow Cytometry)定量分析
核心原理:AF488的熒光信號可被流式細胞儀的488 nm藍光激光高效激發(fā)。AF488-Transferrin可用于流式細胞術中定量分析細胞對轉鐵蛋白的攝取效率。通過檢測AF488陽性細胞的百分比和平均熒光強度,可評估不同細胞類型、不同處理條件下細胞對轉鐵蛋白的內吞效率和受體表達水平。結合細胞表面標志物的其他熒光標記,可實現(xiàn)多參數(shù)免疫表型分析。
四、相關試劑
AF488-人轉鐵蛋白(Human Transferrin, AF488)
AF488-小鼠轉鐵蛋白(Mouse Transferrin, AF488)
AF488-大鼠轉鐵蛋白(Rat Transferrin, AF488)
AF488-全轉鐵蛋白(Holo-Transferrin, AF488)
AF488-脫鐵轉鐵蛋白(Apo-Transferrin, AF488)
AF350-人轉鐵蛋白(AF350-Transferrin)
AF555-人轉鐵蛋白(AF555-Transferrin)
AF594-人轉鐵蛋白(AF594-Transferrin)
AF647-人轉鐵蛋白(AF647-Transferrin)
AF680-人轉鐵蛋白(AF680-Transferrin)
其他熒光染料標記轉鐵蛋白
FITC-轉鐵蛋白(FITC-Transferrin)
四甲基羅丹明-轉鐵蛋白(TRITC-Transferrin)
Texas Red-轉鐵蛋白(Texas Red-Transferrin)
Cy3-轉鐵蛋白(Cy3-Transferrin)
Cy5-轉鐵蛋白(Cy5-Transferrin)
Cy5.5-轉鐵蛋白(Cy5.5-Transferrin)
Cy7-轉鐵蛋白(Cy7-Transferrin)
生物素-轉鐵蛋白(Biotin-Transferrin)
HRP-轉鐵蛋白(HRP-Transferrin)
DyLight 488-轉鐵蛋白(DyLight 488-Transferrin)
ChromPure 人轉鐵蛋白(多種熒光標記)
AF488標記轉鐵蛋白抗體
AF488-抗人轉鐵蛋白單抗(OTI5G2)
AF488-抗人轉鐵蛋白單抗(HTF-14)
AF488-抗人轉鐵蛋白單抗(TW4.20)
AF488-抗人轉鐵蛋白單抗(TF/3001)
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