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試劑詳情

英文名稱： CR-Phycoerythrin

中文名稱： 交聯(lián)藻紅蛋白

CAS： 11016-17-4（Phycoerythrin 通用）

分子式： 無固定化學(xué)式，為多亞基色素蛋白復(fù)合物

分子量： ~240 kDa

溶解性： 溶于部分有機(jī)溶液，溶于水

規(guī)格： 1g，5g，10g（可按需包裝）

純度： 95%+

儲(chǔ)存條件： 干燥、避光，溫度不超-20℃

注意事項(xiàng)： 現(xiàn)配現(xiàn)用，不可頻繁解凍

分子構(gòu)成與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

CR-Phycoerythrin（交聯(lián)藻紅蛋白）屬于藻膽蛋白家族，是一種從紅藻中提取的高分子量熒光色素蛋白復(fù)合物。其基本結(jié)構(gòu)由多個(gè)α、β亞基通過共價(jià)鍵與開鏈四吡咯色素基團(tuán)（藻紅膽素PEB）結(jié)合而成，形成（αβ）?γ六聚體組裝構(gòu)型。該蛋白復(fù)合物分子量約為240 kDa，具有摩爾消光系數(shù)（ε=2.0×10? M?1·cm?1），熒光量子產(chǎn)率可達(dá)0.82以上，使其成為目前已知的熒光標(biāo)記試劑中的一類。CR修飾（crosslinked，交聯(lián)處理）進(jìn)一步增強(qiáng)了蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，顯著降低了亞基解離風(fēng)險(xiǎn)，在長期儲(chǔ)存和反復(fù)凍融條件下表現(xiàn)出更強(qiáng)的抗降解能力。CR-Phycoerythrin的最大激發(fā)波長位于565 nm，最大發(fā)射波長位于575 nm，Stokes位移較小，約為10 nm，熒光信號(hào)集中且背景干擾低。共價(jià)修飾后的分子表面含有多個(gè)活性氨基和羧基基團(tuán)，便于后續(xù)與抗體、鏈霉親和素、核酸探針等功能性生物分子進(jìn)行定向偶聯(lián)。

主要應(yīng)用領(lǐng)域

CR-Phycoerythrin在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，集中體現(xiàn)在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微成像兩大方向。在流式細(xì)胞術(shù)中，該試劑常作為熒光通道FL2（575/30 nm）的標(biāo)記染料，用于多色分析方案中檢測(cè)低豐度抗原。由于CR-Phycoerythrin熒光強(qiáng)度高、發(fā)射光譜窄，與其他常用熒光染料如FITC、APC、PerCP-Cy5.5等光譜重疊極低，適合構(gòu)建四色至八色的多參數(shù)分析體系。在免疫熒光成像實(shí)驗(yàn)中，標(biāo)記后的抗體在共聚焦顯微鏡下能快速定位細(xì)胞表面或胞內(nèi)靶標(biāo)，CR修飾使得標(biāo)記復(fù)合物在固定、滲透、多次洗滌條件下仍保留90%以上的初始熒光強(qiáng)度，顯著降低非特異性背景信號(hào)。此外，CR-Phycoerythrin還可用于時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（TR-FRET）分析，作為供體分子與合適的受體染料搭配，檢測(cè)蛋白-蛋白相互作用或核酸雜交事件。在ELISA和Western blot檢測(cè)中，偶聯(lián)鏈霉親和素的CR-PE可作為高靈敏度檢測(cè)探針，替代傳統(tǒng)酶顯色系統(tǒng)，提升檢測(cè)下限至皮摩爾級(jí)別。

操作規(guī)范與儲(chǔ)存條件

CR-Phycoerythrin對(duì)光、溫度和凍融循環(huán)高度敏感，操作規(guī)范直接決定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。建議將試劑分裝為單次使用量（通常每管50–100 μL），置于棕色微量離心管中，保存于-20℃冰箱，避免反復(fù)凍融。每次取用前，將試劑在冰上緩慢解凍，使用后立即放回冷凍環(huán)境。操作全程需在避光條件下進(jìn)行CR-Phycoerythrin，可使用鋁箔包裹操作臺(tái)或使用紅色濾光片。配制偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)，推薦使用pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）或0.1 M碳酸鹽緩沖液（pH 9.0），避免使用含高濃度硫醇（如DTT、β-巰基乙醇）或還原性物質(zhì)的緩沖液，這些物質(zhì)可能導(dǎo)致蛋白變性或熒光猝滅。偶聯(lián)反應(yīng)完成后，需使用脫鹽柱或透析去除未反應(yīng)的小分子修飾劑，透析液推薦使用含0.1% BSA和0.02% NaN?的PBS溶液。對(duì)于標(biāo)記后抗體的儲(chǔ)存，建議加入終濃度為1%的BSA作為保護(hù)劑，4℃避光短期保存，長期推薦分裝后-20℃凍存。若實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)熒光信號(hào)顯著衰減或非特異性結(jié)合升高，應(yīng)優(yōu)先檢查試劑是否經(jīng)歷多次凍融或長時(shí)間光照暴露。

有關(guān)試劑

與CR-Phycoerythrin功能互補(bǔ)的常用PEG衍生物試劑包括：MAL-PEG-NHS（馬來酰亞胺-聚乙二醇-琥珀酰亞胺酯），用于CR-PE與含巰基的抗體的位點(diǎn)特異性偶聯(lián)；NH?-PEG-COOH（氨基-聚乙二醇-羧基），可用于擴(kuò)展CR-PE表面功能基團(tuán)，增加偶聯(lián)靈活性；mPEG-SCM（甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺酯），適合對(duì)CR-PE進(jìn)行PEG化修飾以降低免疫原性。此外，與CR-Phycoerythrin聯(lián)用的熒光試劑包括APC（別藻藍(lán)蛋白，激發(fā)633 nm，發(fā)射660 nm）和PerCP（多甲藻葉綠素蛋白，激發(fā)488 nm，發(fā)射678 nm），三者搭配可構(gòu)建三色流式分析體系。推薦使用的溶劑和穩(wěn)定劑包括：HPLC級(jí)DMSO（用于溶解疏水性小分子偶聯(lián)劑）、0.22 μm濾膜過濾的PBS（避免雜質(zhì)干擾）、去離子水（電阻率≥18.2 MΩ·cm）。以上試劑均需在超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，使用前做無菌檢驗(yàn)。注意：該試劑僅用于科學(xué)研究，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或其他治療型用途。

本文試劑資料由西安凱新生物科技小華編輯整理。