熒光特性方面，吖啶橙在不同結合狀態(tài)下呈現(xiàn)顯著不同的發(fā)射光譜：當嵌入雙鏈DNA時，其最大發(fā)射波長約為525 nm（綠色熒光）；當與單鏈核酸或RNA結合時，由于聚集態(tài)的形成核酸選擇性熒光染料吖啶橙，發(fā)射波長紅移至約650 nm（紅色熒光）。基于這一光譜差異，吖啶橙可實現(xiàn)對DNA與RNA的選擇性區(qū)分。

【主要應用領域】

1. 細胞周期與凋亡分析：在流式細胞術中，吖啶橙被廣泛用于區(qū)分細胞周期的不同階段（G0/G1、S、G2/M），其染色后DNA熒光強度與細胞DNA含量呈線性相關。實驗典型濃度范圍為5–20 μg/mL，染色時間15–30分鐘，需在避光條件下操作以保證信號穩(wěn)定性。

2. 核酸選擇性染色與成像：在熒光顯微鏡下，吖啶橙可同時標記細胞核（DNA，綠色）與核仁及胞漿RNA（紅色），實現(xiàn)亞細胞結構可視化。對于固定樣本，推薦使用PBS稀釋至1–5 μg/mL進行染色；活細胞染色則需更低濃度（0.5–2 μg/mL）并縮短孵育時間。

3. 核酸凝膠電泳顯色：作為替代溴化乙錠的熒光染料，吖啶橙可用于瓊脂糖凝膠中DNA的快速檢測。染色方法分為后染與預染兩種，后染濃度通常為3–5 μg/mL，浸泡時間20–40分鐘，使用UV或藍光激發(fā)即可成像。

【操作規(guī)范與儲存條件】

配制儲存液時，建議以去離子水或PBS緩沖液（pH 7.2–7.4）配制1 mg/mL母液，分裝后避光冷凍保存。母液在-20℃條件下可穩(wěn)定保存6個月，但反復凍融會導致熒光強度下降，建議單次分裝量滿足一次實驗用量。

實際染色操作中，需根據(jù)樣本類型優(yōu)化染料濃度與染色時間。對于細胞懸液，推薦在染色完成后立即上機檢測，避免長時間放置導致非特異性結合增加。對于組織切片，建議在染色后進行兩次PBS漂洗（每次5分鐘）以降低背景熒光。

【有關試劑】

溴化乙錠（EB，CAS：1239-45-8）：經(jīng)典核酸嵌入型染料，但具有強致突變性，需謹慎操作

SYBR Green I（CAS：163795-75-3）：高靈敏度DNA染料，適用于實時定量PCR與凝膠成像

DAPI（CAS：28718-90-3）：細胞核特異性染料，優(yōu)先結合富含AT的DNA區(qū)域，適用于固定細胞核定位

Hoechst 33258（CAS：23491-44-3）：活細胞膜通透性核酸染料，常用于活細胞DNA含量分析

碘化丙啶（PI，CAS：25535-16-4）：膜不透過性染料，專門用于死細胞核染色與細胞周期檢測

注：該試劑僅用于科學研究，不能用于人體實驗或其他治療型用途。

本文試劑資料由西安凱新生物科技小華編輯整理。

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Acridine Orange，10127-02-3吖啶橙核酸熒光染料技術參數(shù)與實驗應用指南

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