試劑詳情
英文名稱:ABG substrate aglycon-d5
中文名稱:ABG底物aglycon-d5(氘代標記非糖基配體)
分子式:CxHyD5Oz(具體碳氫氧數依據母核結構,氘原子取代位點由合成路線決定)
溶解性:溶于部分有機溶劑(如DMSO、DMF、乙腈),微溶于水
規格:1 mgABG substrate aglycon-d5,5 mg,10 mg(可按需包裝)
儲存條件:干燥、避光,溫度不超過-20℃(長期儲存推薦-80℃)
注意事項:現配現用,不可頻繁解凍;使用前平衡至室溫,避免吸潮
用途聲明:該試劑僅用于科學研究,不能用于人體實驗或其他治療型用途。
分子構成與結構特點
ABG substrate aglycon-d5 是基于β-葡萄糖醛酸酶(ABG)底物設計的氘代非糖基配體類似物。其核心結構由三部分組成:
1. 芳香族母核:通常為4-甲基傘形酮(4-MU)或熒光素類衍生物,作為熒光信號釋放基團;
2. 糖苷鍵連接位點:aglycon指代去糖基化后的配體部分,即不包含葡萄糖醛酸的母體結構;
3. 氘代標記位點:在母核的甲基或芳香環上引入5個氘原子(-CD3或芳香環-D5),用于質譜定量或示蹤實驗。
氘代標記不改變底物與酶的結合特異性,僅通過同位素效應降低代謝速率,提高檢測靈敏度;
相比天然底物,aglycon-d5的半衰期延長,適用于動力學研究中區分酶解產物與背景信號;
溶解性受母核極性影響,一般建議使用DMSO預溶后再稀釋至水性緩沖液。
主要應用領域
1. 糖苷酶活性檢測與動力學分析
ABG底物aglycon-d5作為β-葡萄糖醛酸酶的特異性熒光/質譜底物,適用于:
酶活抑制實驗:通過監測熒光強度或質譜信號變化,計算IC50值;
底物特異性驗證:與天然底物對比,評估氘代對酶解速率的影響。
2. 代謝標記與示蹤研究
在細胞或組織體系中,aglycon-d5可作為穩定同位素標記的探針,用于追蹤糖苷鍵水解過程;
結合LC-MS/MS技術,通過特征同位素質量差(+5 Da),區分內源性代謝物與添加底物。
3. 藥物?酶偶聯體系開發
在抗體偶聯藥物(ADC)或前藥設計中,aglycon-d5可用于驗證酶響應釋放機制;
通過氘代信號降低背景干擾,提高釋放效率定量準確性。
操作規范與儲存條件
操作要點
溶解方式:推薦使用無水DMSO配制成10 mM母液,分裝后-20℃保存,避免反復凍融;
緩沖液配制:使用前將母液稀釋至含0.1% BSA的磷酸鹽緩沖液(pH 7.4),減少非特異性吸附;
反應體系:通常底物終濃度設為10–100 μM,酶濃度根據活性調整,反應溫度37℃孵育30分鐘,加終止液(如0.2 M Na?CO?)終止反應。
儲存條件
干粉狀態:密封于棕色玻璃瓶中,置于干燥器內,-20℃可穩定保存12個月;
溶液狀態:分裝至低吸附管中,-80℃保存,避免光照,解凍后1周內使用完畢。
故障排查
信號低于預期:檢查底物是否降解(HPLC純度下降),或緩沖液pH值偏離最佳范圍(6.5–7.5);
背景熒光過高:確認是否使用了非熒光級DMSO,或反應管存在非特異性吸附。
有關試劑
ABG substrate aglycon(非氘代對照品)
Fluorescein di-β-D-glucuronide
β-glucuronidase(來源于大腸桿菌或人源重組酶)
供應商:西安凱新生物科技有限公司
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