PEI轉染試劑怎么用才對？這10處細節提升轉染效率｜轉染優化指南（下）

摘要：本文繼續深挖PEI細胞轉染的進階實操！黃金質粒比例（2:1.5:1）、PEI與DNA的最佳配比，AB液混合法及孵育體積控制，曼博生物幫您厘清提升轉染效率的核心參數，明確慢病毒/AAV的最佳收獲時間點。

關鍵詞：細胞轉染,PEI轉染試劑,質粒轉染,DNA轉染, AAV病毒,蛋白生產工藝,干細胞治療,細胞培養,細胞與基因治療

細胞轉染技術在CGT開發中扮演著重要角色。為提高轉染效率和病毒包裝產量，研究者們需要對轉染工藝中的多個參數進行優化。上期文章曼博生物已從細胞轉染的培養基選擇、培養空間與體積、細胞質量與狀態、細胞密度，以及質粒DNA的質量與用量角度提出了5個優化關鍵點，本期將繼續為大家帶來其他優化轉染的實踐指南。

首先，是質粒比例。對于AAV包裝，載體質粒：復制&包裝質粒：轉移目標基因的初始建議質粒比例為2:1.5:1。

其次，PEI與質粒DNA的比例直接影響復合體的穩定性，建議從2:1開始優化。

同時，孵育體積影響質粒DNA與PEI復合體的形成和與細胞的有效接觸。建議孵育體積維持在總培養體積的5%-10%。

對于孵育方式與時間，推薦采用AB液的形式，即分別配置質粒DNA溶液和PEI溶液，然后將PEI溶液加入質粒DNA溶液中。孵育時間建議控制在10-20分鐘。

最后，由于病毒顆粒的收獲時間影響病毒滴度，因此建議慢病毒在轉染后48小時收獲，AAV病毒在轉染后72小時收獲。

細胞轉染的成功依賴于對多個參數的嚴格優化，希望這兩期PEI轉染試劑關鍵參數的分享能為科研伙伴提供實用的參考。

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本文基于Polysciences公開資料由其中國提供商上海曼博生物整理，僅用于科研信息分享。上海曼博生物可提供Polysciences PEI轉染試劑、PEI MAX及相關細胞轉染產品，支持AAV病毒包裝、慢病毒包裝、質粒轉染及細胞與基因治療相關研究與應用。可掃描下方圖片查看具體信息或者直接聯系上海曼博生物。