eProtein Discovery蛋白表達系統應用案例：破解轉錄因子制備難題（上篇）

摘要：eProtein Discovery依托無細胞蛋白表達篩選系統和數字微流控技術實現蛋白表達篩選自動化，為復雜難表達轉錄因子的制備提供新路徑。

關鍵詞：蛋白表達系統,無細胞蛋白表達篩選,eProtein Discovery,無細胞蛋白表達,無細胞蛋白合成,難表達蛋白快速制備,數字微流控蛋白篩選

一、轉錄因子研究的制備難點

轉錄因子是細胞通路的核心調控蛋白，參與細胞發育、分化等生理過程。其中，轉錄因子L（TFL）參與多項組織發育，其表達異常與部分發育障礙相關，是相關領域的重要研究靶點。

但TFL的制備存在諸多困難：該蛋白包含LIM結構域、同源結構域及內在無序區域，在大腸桿菌體系中表達易形成不溶性包涵體，復性難度大，功能性蛋白獲取量少；在昆蟲細胞、哺乳動物細胞、酵母等其他體系中，也存在獲取量不足、純化繁瑣、蛋白易降解等問題，阻礙了TFL的結構解析、功能研究及靶向研究推進。

針對這一行業痛點，nuclera推出的eProtein Discovery無細胞蛋白表達篩選系統展現出獨特優勢。上海曼博生物是無細胞蛋白表達、無細胞蛋白合成、cell free system等應用解決方案中國提供商，可掃描下方圖片訪問曼博生物網站查看具體信息！研究人員借助該系統，成功完成全長TF L及兩個功能結構域的無細胞蛋白表達與純化，通過優化蛋白可溶性功能篩選條件，驗證了制備蛋白的DNA結合功能。這一實踐不僅為這類復雜難表達蛋白研究提供了可參考的技術方案，也充分體現了無細胞蛋白合成技術的應用價值，下面將詳細解析該系統的核心技術與工作流程。

二、eProtein Discovery系統的核心技術與工作流程

eProtein Discovery是nuclera推出的無細胞蛋白合成系統，又稱體外轉錄/翻譯系統，其核心優勢在于擺脫對活體細胞培養的依賴，實現蛋白制備的自動化。該系統依托cell-free system，結合數字微流控蛋白篩選、納升液滴蛋白表達等關鍵技術，實現無細胞蛋白表達自動化，為難表達蛋白快速獲取提供技術保障。

具體而言，該系統可同時篩選24種可溶性蛋白或11種膜蛋白，每種蛋白搭配8組不同表達條件，48小時內即可完成從DNA到活性蛋白的制備與純化，其篩選結果還能為體內表達體系的菌株選擇、質粒設計提供參考，順暢銜接后續蛋白純化表達流程。其核心工作流程分為三個關鍵階段，全程自動化操作，可有效縮短蛋白制備周期，具體如下：

1. 篩選條件優化：將設計好的eGene構建體、定制化無細胞混合體系加載至數字微流控卡盒，系統24小時內可完成192組表達條件篩選，生成192組表達數據和30組純化數據，自動分析并篩選出適配的表達組合，確定蛋白放大生產的適配條件；

2. 蛋白放大制備：根據篩選結果，選取對應表達組合進行過夜放大培養，借助專用純化試劑完成蛋白純化，從而獲得微克級目標蛋白，可通過SDS-PAGE、Western blot等實驗驗證蛋白表達與純化效果；

3. 蛋白功能驗證：將制備好的蛋白用于后續功能實驗，驗證其生物學功能，完成從蛋白制備到功能研究的閉環，為后續科研提供直接支撐。

以上就是eProtein Discovery無細胞蛋白表達篩選系統的核心技術原理與工作流程，明確了該系統實現難表達蛋白快速制備的具體路徑。
在下篇內容《TFL無細胞蛋白制備與篩選——eProtein Discovery蛋白表達系統應用案例》中，我們將結合具體實驗案例，詳細闡述該系統在TF L制備、驗證中的實際應用，以及其在多個科研領域的應用價值。

本文基于無細胞蛋白表達、無細胞蛋白合成等應用公開資料由中國解決方案提供商上海曼博生物整理，用于科研信息分享。上海曼博生物可提供eProtein Discovery蛋白表達系統、無細胞蛋白表達篩選系統及難表達蛋白快速制備相關產品與技術支持。可掃描下方圖片查看無細胞蛋白表達解決方案。

拓展閱讀

• TFL無細胞蛋白制備與篩選——eProtein Discovery蛋白表達系統應用案例（下篇）-可查看后續文章