摘要:LN521、LN111經體外及動物實驗驗證,在多巴胺能神經元、星形膠質細胞等培養中展現出特異性適配效果,相關實驗數據為神經科學研究提供實操參考。
在神經細胞體外培養領域,細胞外基質是調控細胞分化、存活、功能成熟的關鍵因素,無動物源、化學成分明確的重組層粘連蛋白,因能規避傳統動物源基質的批次差異與倫理風險,成為該領域的重要實驗材料。LN521與LN111作為兩款核心亞型,在神經細胞培養中呈現出不同的適配特性,其相關實驗結果均經體外細胞培養及動物體內移植驗證,數據具備可重復性與參考性。對于實驗中使用的層粘連蛋白產品,可通過曼博生物-BioLamina中國提供商獲取。可聯系Biolamina LN521層粘連蛋白中國直售提供上海曼博生物,了解更多BioLamina層粘連蛋白產品信息
LN111為多巴胺能神經元體外定向分化的特異性適配基質,可支持人胚胎干細胞(hESC)向多巴胺前體細胞的分化,相關實驗呈現出高純度、高產量的培養效果:
1. 體外培養中,LN111上培養的hESC衍生多巴胺前體細胞,FOXA2+、LMX1A/B+雙陽性細胞純度達90.4%±0.9%,形成高純度同質細胞群;

圖1. LN111上培養的hESC-DA的FOXA2和LMX1A/B的免疫熒光染色(比例尺為100μm)
2. 與傳統胚狀體(EB)分化方案相比,LN111培養體系下的多巴胺前體細胞產量實現43倍提升;
3. 體內移植實驗中,將300,000個經LN111培養的TH+、hNCAM+多巴胺細胞移植至單側6-OHDA損傷裸鼠體內,27周后細胞可成功存活并穩定分泌多巴胺;

圖2. LN111上培養得到DA前體細胞量統計及移植27周后細胞存活與多巴胺分泌測定
(比例尺為1.5mm)
4. 3D類器官培養中,經LN111生物功能化的重組3D基質Biosilk,可明顯改善腹側中腦(VM)類器官中多巴胺的空間分布模式,同時降低類器官內部及相互之間的實驗變異性。

圖3.實時計時電流法測量傳統水凝膠與Biosilk-LN111 VM類器官中多巴胺的胞吐情況及相對定量結果
LN521具備廣譜的神經細胞適配性,經實驗驗證可支撐星形膠質細胞、皮質神經元等十余類神經系統細胞的培養與功能模型構建,且實驗重復性良好,核心實驗結果如下:
1. LN521可支持AF22、C1、C9三株不同hiPSC細胞系,均分化為高度可重復的NES-Astro星形膠質細胞模型,該模型經SLC1A3抑制劑UCPH101處理后,谷氨酸攝取的調控反應可被準確檢測;

圖4. Biolaminin 521支持臨床相關星形膠質細胞模型開發過程
2. 細胞治療級LN521(CT521)培養的ESC衍生星形膠質細胞(hES-AS),分化7天后可穩定表達GFAP、GLAST、S100β等星形膠質細胞特異性標志物;將其移植至ALS模型大鼠體內后,經Kaplan-Meir分析驗證,可明顯延遲模型大鼠的疾病發作時間。

數據圖5. Biolaminin 521 CTG上生成的hES-AS的標志物免疫熒光染色(比例尺為100μm)及ALS大鼠移植后生存評估
1. LN521可支持人多能干細胞(hPSC)的CRISPR/Cas9基因編輯操作,為基因編輯后細胞的培養提供穩定基質支撐;
2. 經基因編輯的hPSC在LN521前期培養后,于LN111上可實現連續分化,從而形成功能性皮質神經網絡;
分化后的皮質神經元可正常表達早期深層標志物CTIP2、Tbr1與后期上層標志物Brn2、Satb2,且深層、上層神經元相關標記物的轉錄組表達量均明顯提升,成功構建結構與功能完整的皮質神經元模型。

數據圖6. 對Biolaminin上培養分化得到的皮質特異性神經元進行免疫熒光染色檢測早期后后期標志物(比例尺為50µm)
LN521、LN111在神經細胞體外培養中經系統的體外及動物實驗驗證,展現出穩定且特異性的培養效果,其相關實驗數據、細胞適配方案與協同使用策略,為多巴胺能神經元、星形膠質細胞、皮質神經元等多類神經細胞的培養提供了具體、可操作的實驗參考,也為神經科學研究中細胞培養體系的優化提供了重要依據。上海曼博生物作為瑞典BioLamina中國直售提供商,可提供BioLamina全系列層粘連蛋白產品,保障科研實驗材料的穩定供應,可通過掃描下方圖片訪問曼博生物網站了解更多BioLamina層粘連蛋白產品信息

不能直接互換。二者適配場景具有特異性:LN111更側重多巴胺能神經元的定向分化,LN521則適配星形膠質細胞、皮質神經元等多類神經細胞的廣譜培養,且支持基因編輯后細胞的前期培養,需根據目標細胞類型選擇。
常規包被濃度參考:LN521推薦0.5-1.0 μg/cm2,LN111推薦1.0-2.0 μg/cm2(具體需結合培養器皿與細胞系調整);均支持37℃包被30分鐘或4℃過夜,包被后無需洗滌,可直接接種細胞,兼容無血清培養基。
無需額外添加。LN521與LN111均支持單細胞傳代,其天然分子結構可維持細胞存活與穩定性,避免傳統培養中因單細胞接種導致的凋亡,簡化操作流程。
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