分子克隆實驗是分子生物學中常見的一個實驗。感興趣的基因插入到表達載體中,而后轉化進入宿主內,但是并非所有質粒都包含目的基因,怎樣篩查出包含有目的基因的菌落呢?藍白斑篩選法可能是使用最為廣泛的用來篩選含插入片段的目的菌落的方法。
Blue-Gal與IPTG可聯合用于分子生物學中的藍白斑篩選技術。Blue-Gal與IPTG聯合應用實現了lacZ基因在大腸桿菌中的有效表達,基于藍斑的形成檢測了啟動子活性、蛋白結合以及核苷酸變異,為重組DNA技術提供了重要工具,在分子生物學研究中有較廣泛應用。
規格參數:
HGS-01045 5-溴-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 Blue-Gal Bluo-Gal 97753-82-7
HA21014 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG 367-93-1 1g/5g 30元/85元
Blue-Gal與IPTG聯合使用原理:
IPTG作為lac操縱子的誘導劑,可誘導含lac操縱子的重組質粒在大腸桿菌中的表達。Blue-Gal作為lacZ報告基因的底物,在其表達時可被β-半乳糖苷酶水解,生成藍色產物,產生藍斑。沒有lacZ表達的細菌培養物保持白色,產生白斑。通過藍白斑的對比,可檢測重組質粒的表達與否。
Blue-Gal與IPTG聯合使用的應用:
(1)重組質粒的篩選
將含有不同序列的重組質粒轉入大腸桿菌,IPTG誘導并與Blue-Gal作用,通過藍白斑的形成判斷哪些質粒表達了lacZ,實現正向篩選。
(2)啟動子活性的檢測
將不同啟動子控制的lacZ報告基因重組質粒轉入大腸桿菌,IPTG誘導并與Blue-Gal反應,啟動子活性越高的,藍斑出現越多,用于評價啟動子的活性強弱。
(3)變異體的篩選
將lacZ作為報告基因的重組質粒隨機誘變后轉入大腸桿菌,IPTG誘導并與Blue-Gal作用,檢測藍斑消失的變異菌株,找出影響基因表達的重要區段或關鍵核苷酸。
(4)蛋白相互作用的檢測
在兩個蛋白質之間克隆lacZ,使兩蛋白的相互作用可導致lacZ表達。將重組質粒轉入大腸桿菌,在不同條件下IPTG誘導并Blue-Gal染色,檢測藍斑的形成與消失,判斷兩蛋白的相互作用與結合。
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