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聚蔗糖 - 泛影葡胺分離液的使用步驟

時間：2026-7-21閱讀：22

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一、產(chǎn)品基礎(chǔ)信息

規(guī)格：200mL

儲存條件：本產(chǎn)品對光敏感，室溫避光儲存，保質(zhì)期 1 年；無菌開封后，室溫保存。

使用范圍：僅供科學(xué)研究、實驗使用；

嚴(yán)禁用于食品、藥品、化妝品等用途；嚴(yán)禁用于醫(yī)療診斷、臨床治療等其他用途。

二、產(chǎn)品說明

本產(chǎn)品是無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液，用于分離人外周血單個核細(xì)胞。

外周血單個核細(xì)胞（PBMC）包含淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，各類血細(xì)胞密度存在差異：

紅細(xì)胞、粒細(xì)胞：密度約 1.090 g/mL
淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞：密度 1.075~1.090 g/mL
血小板：密度 1.030~1.035 g/mL

利用密度介于 1.075~1.092 g/mL 的近等滲分離液進(jìn)行密度梯度離心，不同密度血細(xì)胞會按梯度分層，實現(xiàn)細(xì)胞分離。

三、產(chǎn)品指標(biāo)

檢測項目	指標(biāo)參數(shù)
密度	1.077±0.001g/mL
滲透壓	290~350 mOsm/kg H?O
無菌處理	0.1μm 濾膜過濾

四、操作步驟

1、取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉、肝素抗凝均可）或去纖維蛋白血液，使用等體積全血組織稀釋液或 PBS 稀釋血液。

2、離心管內(nèi)加入分離液：稀釋后血液體積＜3mL，加 3mL 分離液；稀釋后血液體積≥3mL，加入等體積分離液；管內(nèi)總液體體積不可超過離心管 2/3。使用巴氏吸管將稀釋血液緩慢平鋪于分離液液面上方，保證兩層液面分界清晰；長時間加樣后離心前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉為正常現(xiàn)象。

3、室溫、水平轉(zhuǎn)子離心：500~1000g，離心 20~30min；血液體積越大，所需離心力、離心時間越長，最高離心力不可超過 1200g，可自行摸索離心條件。

4、離心分層結(jié)果（自上而下）：稀釋血漿層→透明分離液層→白膜層（單個核細(xì)胞）→管底紅細(xì)胞與粒細(xì)胞層。

5、小心吸取白膜層細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 15mL 潔凈離心管，加入 10mL PBS / 細(xì)胞洗滌液重懸洗滌，250g 離心 10min。

6、棄上清，加入 5mL PBS / 細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g 離心 10min。

7、重復(fù)第 6 步洗滌操作。

8、棄上清，重懸細(xì)胞備用。

五、注意事項

A. 開封前顛倒混勻；無菌條件下啟封，防止微生物污染，延長保存時間。

B. 全程室溫（18℃~25℃）操作，低溫環(huán)境可預(yù)熱分離液；4℃低溫離心會大幅增加白膜層紅細(xì)胞污染。

C. 優(yōu)先使用采血 2h 內(nèi)新鮮抗凝血；禁止冷凍、冷藏血液樣本，保證單個核細(xì)胞活性。

D. 稀釋、洗滌緩沖液 / 培養(yǎng)液不可含鈣、鎂離子，會造成血細(xì)胞凝集，降低細(xì)胞得率與純度。

E. 聚苯乙烯類塑料制品易產(chǎn)生靜電，導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。

F. 血液粘稠度、溫度差會改變分離效果，可調(diào)整離心轉(zhuǎn)速、時間優(yōu)化實驗條件。

G. 吸取白膜時若吸入過多分離液，會混入粒細(xì)胞；吸入過多血漿層，會引入血漿蛋白、血小板污染。

H. 若后續(xù)需細(xì)胞培養(yǎng)，采血、分離全程嚴(yán)格無菌操作，避免微生物污染。

I. 不同動物血細(xì)胞比重、帶電特性存在差異，定制分離液需告知比重、動物種屬、目標(biāo)分離細(xì)胞名稱。

六、安全操作規(guī)范

1、實驗全程穿戴實驗服、防護(hù)面罩、實驗手套，做好防護(hù)，禁止皮膚直接接觸產(chǎn)品。

2、剩余廢液、廢棄分離液不可隨意丟棄，嚴(yán)格按照實驗室生物、化學(xué)廢棄物管理規(guī)定統(tǒng)一處理。