介紹
細菌內毒素檢測（BET，Bacterial Endotoxin Testing）已使用鱟試劑進行了數十年，該溶解物來源于鱟血。該檢測通 過檢測革蘭氏陰性菌產生的脂多糖（LPS，lipopolysaccharide）內毒素來實現，對于藥品、醫療器械和生物治療產品 的放行至關重要。最近，制藥和生物技術行業已轉向重組（如：合成）替代品，這些替代品在內毒素檢測方面保持了 等效的靈敏度和特異性，同時減少了對物種鱟的影響。
目前市場上有兩種主要的重組試劑：重組 C 因子（rFC，recombinant Factor C）和重組級聯試劑（rCR，recombinant cascade reagent）。雖然這兩種檢測方法都利用合成生物學來復制天然凝血級聯的內毒素檢測機制，但它們在生化設 計、檢測動力學、監管接受度和實際應用方面存在根本性差異。本文對 rFC 和 rCR 方法與鱟試劑方法進行了全面比較， 探討了它們在作用機制、分析性能特征以及兩種試劑的實際應用評價方面的差異。
傳統的鱟試劑反應級聯包含 B 因子、C 因子、凝固酶原，以及在顯色試劑的情況下，還包含變色底物。這種方法對內 毒素和 β-葡聚糖都敏感，β-葡聚糖可來源于酵母或霉菌。幾十年來，鱟試劑一直是主要方法，直到 2003 年首引入合 成鱟試劑 rFC。rFC 僅模擬鱟試劑酶級聯的一部分，即 C 因子。最近的替代品 rCR 包含完整的合成鱟試劑級聯，并于 2021 年引入。本文件將比較 rFC 和 rCR 之間的關鍵差異。
評估重組試劑
rFC 和 rCR 均被《美國藥典》USP <85>《細菌內毒素檢測》和 USP <86> 《使用重組試劑進行細菌內毒素檢測》認可 為傳統鱟試劑的替代品，這些標準概述了檢測和定量測定制藥產品和醫療器械中細菌內毒素的批準方法。在評估市售 用于內毒素檢測的重組試劑（rFC 或 rCR）時，用戶必須驗證試劑與其特定產品的兼容性，并確認其性能特征。用戶 應證明所選的重組試劑能夠檢測廣泛范圍的內毒素，以確保患者安全。這通常通過利用供應商的初始驗證包，并根據 需要輔以針對特定產品的測試來完成。鑒于本文中強調的性能差異，應仔細考慮 rFC 的簡化單因子方法或 rCR 的完整 級聯機制哪一種更適合預期的應用。
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