一、產(chǎn)品詳細(xì)描述

•英文品名：IVISbriteD-LuciferinPotassiumSaltBioluminescentSubstrate(100mg)(XenoLight)

•中文參考譯名：IVISbriteD-熒光素鉀鹽生物發(fā)光底物（100mg）（XenoLight系列）

•核心品牌：Revvity（瑞孚迪），由PerkinElmer（珀金埃爾默）生命科學(xué)業(yè)務(wù)升級而來，繼承了其在高靈敏度檢測領(lǐng)域的基因。

•主要貨號：122799A-100MG。此外，該產(chǎn)品體系還包含其他規(guī)格變體，例如單瓶裝1克（貨號122799A）、5瓶裝1克（貨號122799A-5）以及10瓶裝1克（貨號122799A-10），以滿足不同通量與周期的實驗室需求。

•物理形態(tài)：白色至類白色凍干粉末（Lyophilized），這種干燥狀態(tài)極大地方便了長期儲存與精準(zhǔn)稱量，并能有效抑制因水合作用導(dǎo)致的底物降解。

•核心化學(xué)式與分子量：C11H7KN2O3S2，分子量約為318.4。鉀鹽的形式賦予了該底物的水溶性與溶解速率。

•應(yīng)用范疇：專為實現(xiàn)高質(zhì)量、高信噪比的體內(nèi)（Invivo）及體外（Invitro）生物發(fā)光成像而設(shè)計。

二、工作原理深度解析

知其然，更需知其所以然。為了幫助您更好地把控實驗節(jié)奏，我們有必要深入剖析這套經(jīng)典發(fā)光系統(tǒng)的生化機制。

本產(chǎn)品中的“D-熒光素"（D-Luciferin）是螢火蟲生物發(fā)光系統(tǒng)（FireflyLuciferaseSystem）的核心底物。當(dāng)您的實驗?zāi)Ｐ停ㄈ缒[瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因小鼠或慢病毒感染的細(xì)胞系）表達(dá)了螢火蟲熒光素酶（FireflyLuciferase,FLuc）后，在氧氣和三磷酸腺苷（ATP）存在的生理環(huán)境下，加入的熒光素會被熒光素酶催化氧化。

這個氧化反應(yīng)并非簡單的物質(zhì)轉(zhuǎn)換，而是一個激發(fā)態(tài)到基態(tài)的躍遷過程。在氧化過程中，熒光素會釋放出二氧化碳（CO2）并產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的氧熒光素（Oxyluciferin）。當(dāng)氧熒光素從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，便會以光子的形式釋放多余的能量。由于這一過程嚴(yán)格依賴于ATP和螢光素酶的濃度，因此所發(fā)出的光子數(shù)量能夠與細(xì)胞內(nèi)的代謝活性或目標(biāo)酶的表達(dá)水平建立起極為精確的定量關(guān)系。

更為巧妙的是，D-熒光素具有出色的細(xì)胞膜通透性。這意味著，無論是體外培養(yǎng)的細(xì)胞還是活體動物體內(nèi)的深層組織，只需將溶解好的底物加入體系或注射入體內(nèi)，它便能自發(fā)穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部與熒光素酶相遇，從而點亮特定的細(xì)胞群。這種非侵入性或微創(chuàng)的示蹤方式，正是當(dāng)今腫瘤學(xué)、免疫學(xué)及藥物研發(fā)領(lǐng)域夢寐以求的技術(shù)手段。

三、產(chǎn)品核心特點

在競爭激烈的科研試劑市場中，本產(chǎn)品之所以能成為眾多高水平實驗室的金標(biāo)準(zhǔn)，得益于其在制造工藝與質(zhì)控體系上的多重優(yōu)勢：

1.化學(xué)純度與批間一致性：本產(chǎn)品的合成路線經(jīng)過精心優(yōu)化，雜質(zhì)含量被壓制到極低水平。每一批次出廠前均經(jīng)過嚴(yán)苛的核磁共振（NMR）和高效液相色譜（HPLC）雙重檢測，確保不同時間、不同批次購買的產(chǎn)品在性能上保持高度一致。這對于需要長期開展縱向動物實驗的研究者而言，無異于吃下了一顆定心丸。

2.優(yōu)異的溶解性能與水溶性：作為鉀鹽形式，它相較于游離酸形式更容易溶于水或緩沖鹽溶液，不易產(chǎn)生沉淀，能夠有效避免因底物結(jié)晶導(dǎo)致的管路堵塞或注射部位刺激。

3.極低的生物毒性：在配方設(shè)計中，我們充分考量了活體動物的耐受度。在推薦的工作濃度范圍內(nèi)，該底物對細(xì)胞活力和動物生理狀態(tài)幾乎不產(chǎn)生干擾，確保了實驗結(jié)果的生理學(xué)真實性。

4.廣泛的系統(tǒng)兼容性：雖然產(chǎn)品冠以“IVISbrite"之名，但它絕不僅局限于搭配某一特定品牌的成像設(shè)備。它與市面上絕大多數(shù)配備高靈敏度制冷CCD相機的活體成像系統(tǒng)（如IVIS系列、Spectrum系列、Quantum系列等）均能適配，充分發(fā)揮設(shè)備的最大靈敏度。.

四、解決實驗中的核心痛點

在日常的科研活動中，研究者們在使用普通生物發(fā)光底物時常常會遇到諸多令人頭疼的問題，而本產(chǎn)品正是為了直擊這些痛點而生：

•痛點一：信號衰減快，難以捕捉動態(tài)過程。許多劣質(zhì)底物在體內(nèi)代謝過快，導(dǎo)致發(fā)光窗口期極短，極易錯過最佳拍攝時機。本產(chǎn)品經(jīng)過特殊的穩(wěn)定化處理，能夠在動物體內(nèi)維持較長時間的有效濃度，為您從容調(diào)整動物體位、聚焦拍照預(yù)留了充足的時間。

•痛點二：背景噪音高，弱信號被淹沒。底物中的雜質(zhì)不僅會與金屬離子發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生非特異性發(fā)光，還會增加組織的自體熒光。本產(chǎn)品的高純度特質(zhì)極大程度地壓低了背景噪音，讓深埋在組織深處的微小轉(zhuǎn)移灶也能脫穎而出。

•痛點三：溶解度差，易析出結(jié)晶。普通底物在配制高濃度母液時極易析出，不僅造成浪費，析出的晶體還可能在注射時引起動物強烈的刺痛感，導(dǎo)致動物躁動甚至死亡。鉀鹽形態(tài)的本品遇水即溶，極大地提升了動物福利與實驗安全性。

五、儲存與運輸規(guī)范

為了保持底物的最佳活性，正確的儲存與運輸至關(guān)重要。請務(wù)必遵守以下規(guī)范：

•運輸條件：產(chǎn)品出廠時會放入足量的藍(lán)冰（BlueIce）中進(jìn)行冷鏈運輸，確保其在路途中始終處于低溫環(huán)境。

•未開封儲存：收到產(chǎn)品后，若不立即使用，請將其存放在-20°C的冰箱中避光保存。在此條件下，凍干粉末可保持穩(wěn)定長達(dá)數(shù)月甚至更久。

•復(fù)溶后儲存：建議在無菌環(huán)境下（如超凈工作臺內(nèi)）進(jìn)行稱量與溶解。復(fù)溶后的溶液若未用完，嚴(yán)禁在4°C或室溫下長期存放，必須分裝成單次使用的小份（如每管100μL或200μL），置于-20°C或-80°C冷凍保存，以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的活性喪失。

•避光防潮：熒光素對光線和空氣中的水分較為敏感。日常操作時應(yīng)盡量在光線較暗的環(huán)境下進(jìn)行，且每次取出所需用量后，應(yīng)立即將主容器蓋緊并放回干燥器或-20°C冰箱中。

六、詳細(xì)使用方法與實操建議

為了幫助您獲得最佳的成像效果，以下我們將分場景為您提供細(xì)致入微的操作指導(dǎo)。請注意，具體的實驗條件仍需根據(jù)您的實際模型進(jìn)行微調(diào)。

1.體外（InVitro）細(xì)胞與組織成像操作

體外實驗通常用于驗證細(xì)胞系的發(fā)光效率或進(jìn)行藥物篩選的早期評估。

•母液配制：建議您在無菌PBS（磷酸鹽緩沖液）或無菌注射用水中，將本品配制為15mg/mL至30mg/mL的高濃度儲備液。由于本品為鉀鹽，溶解過程通常會非常迅速且清澈。若需長時間保存母液，請分裝后存于-20°C。

•工作液稀釋：根據(jù)您的培養(yǎng)基體積，將母液稀釋至終濃度為150μg/mL至300μg/mL的工作液。例如，在96孔板中，每孔加入100μL含底物的新鮮培養(yǎng)基，最終底物量約為15μg至30μg。

•孵育與檢測：加入底物工作液后，將細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)箱（37°C,5%CO2）中孵育5至10分鐘，讓底物充分進(jìn)入細(xì)胞并與熒光素酶反應(yīng)。隨后，將培養(yǎng)板放入發(fā)光檢測儀（Luminometer）或帶有發(fā)光模式的成像系統(tǒng)進(jìn)行信號采集。

2.體內(nèi)（InVivo）動物成像操作

活體動物成像是該產(chǎn)品的主戰(zhàn)場，常用于腫瘤生長監(jiān)測、免疫細(xì)胞追蹤、基因表達(dá)調(diào)控等。

•底物準(zhǔn)備：將凍干粉溶解于無菌PBS或無菌生理鹽水中，配制成15mg/mL至30mg/mL的無菌母液。此母液可在4°C短期保存數(shù)天，但建議現(xiàn)配現(xiàn)用以獲得最佳效果。

•動物注射：根據(jù)實驗需求選擇合適的注射途徑。方式是腹腔注射（Intraperitoneal,IP），這種方法操作簡便，底物能夠通過腹膜快速吸收進(jìn)入血液循環(huán)。對于某些需要極快起效或特定器官靶向的實驗，也可選擇尾靜脈注射（Intravenous,IV）或皮下注射（Subcutaneous,SC）。

•用量參考：常規(guī)的荷瘤小鼠（20g-25g）每次成像的底物用量約為100mg/kg至150mg/kg。例如，一只20g的小鼠，若按150mg/kg計算，需注射約3mg的底物，相當(dāng)于100μL的30mg/mL母液。

•麻醉與成像時機：注射完成后，需將小鼠放入麻醉誘導(dǎo)盒中進(jìn)行氣體麻醉（如異氟烷）。通常在注射后10到15分鐘，信號達(dá)到峰值。此時應(yīng)盡快將動物轉(zhuǎn)移至成像艙室，調(diào)整好體位并進(jìn)行連續(xù)動態(tài)拍攝。由于本底物發(fā)光持續(xù)時間較長，您可以每隔5分鐘抓取一幀圖像，后期從中挑選出信噪比最高的一張。

3.濃度摸索與對照設(shè)置

不同細(xì)胞系或組織表達(dá)的螢光素酶水平差異巨大。強烈建議您在正式開展大規(guī)模動物實驗前，先通過體外細(xì)胞滴定實驗確定一個合適的底物濃度范圍，避免底物過量導(dǎo)致的“底物抑制效應(yīng)"（即過高濃度的螢光素反而會抑制發(fā)光反應(yīng)）。

七、常見問題與解決方案深度剖析

在漫長的科研道路上，遇到問題是在所難免的。我們整理了使用者最常遇到的幾大難題，并為您提供一套結(jié)構(gòu)化的排查邏輯：

問題一：動物體內(nèi)檢測不到發(fā)光信號

•可能原因1：底物未溶解或發(fā)生了結(jié)晶。鉀鹽雖然易溶，但若水溫過低或pH值不合適，仍可能出現(xiàn)溶解不全的情況。

?解決方案：確保使用溫水（約37°C）或溫和渦旋助溶，配制好的母液應(yīng)是透明的。注射前可用0.22μm濾膜過濾除菌，既去除了可能的微粒，又能確認(rèn)溶解狀態(tài)。

•可能原因2：細(xì)胞或組織中的螢光素酶表達(dá)量極低。

?解決方案：在體外先將細(xì)胞與底物孵育，用酶標(biāo)儀確證其是否能發(fā)出強光。若體外也無信號，則需回顧病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率或轉(zhuǎn)基因動物的構(gòu)建是否成功。

•可能原因3：動物接種位置過深或腫瘤體積過小。

?解決方案：光子的穿透能力有限，特別是對于紅光波段以外的波長，組織在_depth超過1-2厘米時光信號會急劇衰減。可以嘗試更換為更靈敏的成像系統(tǒng)，或改用熒光素酶表達(dá)更強的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

問題二：發(fā)光信號極弱或不穩(wěn)定

•可能原因1：底物降解失效。反復(fù)凍融或儲存不當(dāng)會導(dǎo)致D-熒光素被氧化。

?解決方案：檢查底物顏色，若母液變黃則說明已經(jīng)變質(zhì)，需棄用并重新配制。務(wù)必做好母液的分裝工作。

•可能原因2：動物體溫過低。生物發(fā)光反應(yīng)受溫度影響顯著，低溫會大幅降低酶活性。

?解決方案：確保動物在麻醉期間體溫維持正常，可使用帶有恒溫板的成像平臺，或在麻醉盒內(nèi)放置加熱墊。

•可能原因3：注射劑量不足或吸收不良。

?解決方案：適當(dāng)提高注射劑量（不超過200mg/kg），或改為尾靜脈注射以bypass腹膜吸收環(huán)節(jié)。

問題三：背景噪音過高，特異性信號被掩蓋

•可能原因1：底物純度不夠，含有能產(chǎn)生自發(fā)熒光的雜質(zhì)。

?解決方案：這正是推薦使用本品的原因。若您當(dāng)前使用的正是本品，可檢查是否發(fā)生了交叉污染，或嘗試更換一批號試劑。

•可能原因2：動物毛發(fā)干擾。深色毛發(fā)會產(chǎn)生強烈的自體熒光。

?解決方案：在成像前對特定區(qū)域進(jìn)行剃毛處理，減少毛發(fā)帶來的背景干擾。

•可能原因3：成像系統(tǒng)參數(shù)設(shè)置不當(dāng)。

?解決方案：降低曝光時間或調(diào)整BINNING值，在信號飽和前找到最佳的曝光區(qū)間。

問題四：同一組內(nèi)不同動物之間的信號重復(fù)性極差

•可能原因1：底物分布不均。腹腔注射時，若針頭刺入位置過淺或底物滲漏，會導(dǎo)致實際進(jìn)入體內(nèi)的藥量存在個體差異。

?解決方案：由經(jīng)驗豐富的人員進(jìn)行操作，注射后輕輕按摩注射部位以促進(jìn)吸收。或者統(tǒng)一改為尾靜脈注射。

•可能原因2：動物代謝速率差異。不同小鼠的肝腎功能狀態(tài)不一，導(dǎo)致底物的清除半衰期不同。

?解決方案：增加每只動物的成像時間點（如注射后10min、15min、20min均拍攝），取峰值信號進(jìn)行橫向?qū)Ρ龋枪潭▎我粫r間點。

八、適用范圍與兼容性聲明

本產(chǎn)品是一款通用性的基礎(chǔ)級生物發(fā)光底物，廣泛適用于各類基于螢火蟲熒光素酶（FireflyLuciferase）的報告基因檢測系統(tǒng)。它不僅能夠配合Revvity（原PerkinElmer）旗下的IVISbrite穩(wěn)轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞系和IVISbrite慢病毒顆粒產(chǎn)品，還可用于追蹤任何攜帶FLuc報告基因的細(xì)胞、細(xì)菌或病毒載體。

在設(shè)備端，它與裝備了高靈敏度制冷CCD相機的二維/三維活體光學(xué)成像系統(tǒng)兼容。無論您需要觀察表皮層的傷口愈合，還是深層腦組織、骨髓腔內(nèi)的免疫微環(huán)境，只要您的設(shè)備具備生物發(fā)光（Bioluminescence）檢測通道，本品都能助您一臂之力。

九、注意事項與安全操作規(guī)范

盡管本產(chǎn)品已被證實對實驗動物的急性毒性極低，但在日常操作中仍需秉持“安全第一"的原則：

1.個人防護(hù)：稱量粉末或操作母液時，請務(wù)必穿戴實驗服、佩戴一次性丁腈手套和護(hù)目鏡，避免試劑直接接觸皮膚或吸入粉塵。

2.生物危害防范：任何接觸過活體動物或病原體的廢棄物（如用過的移液槍頭、注射器等）均屬于潛在生物危害物。必須將其浸泡于10%漂白劑溶液中消毒至少30分鐘后，方可作為生物危險廢物丟棄。

3.動物倫理：在進(jìn)行動物實驗時，請嚴(yán)格遵守所在機構(gòu)的動物保護(hù)與使用委員會（IACUC）制定的各項倫理規(guī)范。合理控制麻醉劑濃度，減輕動物痛苦。

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