1、融合體蛋白之間的相互作用是在真核酵母細胞內進行，蛋白質保持天然的折疊狀態，這是其他離體生化檢驗方法所缺乏的，它所證實的蛋白質間相互作用將更接近于體內的真實水平。
2、雙雜交系統的敏感度非常高，蛋白質之間結合常數低至1mmol/L時都可以被偵測。
3、在篩選cDNA 文庫時，雙雜交系統能夠簡捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列，它只需構建質粒而不必準備抗體或純化蛋白，省略了其它體外檢測蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。

酵母雙雜交實驗原理：

　　以Gal4系統為例，BD和AD分別由Gal4蛋白上不同的兩個結構域(1-147aa與768-881aa)構成。在利用GAL4系統篩選cDNA文庫或研究蛋白間的相互作用時，DNA結合結構域與靶蛋白即"誘餌"相結合，轉錄活化結構域與文庫蛋白或要驗證的蛋白相結合。一般情況下，單獨的BD可以與GAL4上游活化序列（GAL UAS）結合但不能引起轉錄，單獨的AD則不能與GAL UAS結合；只有當BD與AD分別表達的融合蛋白由于相互作用而導致兩者在空間上相互靠近時，BD與AD才能與GAL UAS結合并且引起報道基因的轉錄，從而激活下游報告基因，通過這一系列實驗來驗證兩個蛋白之間的相互作用。

★ 酵母單/雙雜交檢測服務項目列表

服務項目	說明	周期	服務報價
酵母單雜交文庫構建技術服務	基于重組方法的文庫構建方案（請參考本頁詳細說明）	4-6周	請聯系客服
酵母單雜交文庫篩選技術服務	DNA—蛋白質相互作用（請參考本頁詳細說明）	12-15周
核蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術服務	基于pDEST22或pGADT7系統	14-16周
膜蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術服務	基于分離的泛素介導的膜蛋白酵母雙雜交系統	14-16周

服務一、酵母單雜交文庫構建服務

　　酵母單雜交體系能在一個簡單實驗過程中，識別與DNA特異結合的蛋白質，同時可直接從基因文庫中找到編碼蛋白的DNA序列，而無需分離純化蛋白，實驗簡單易行。為了獲得良好的酵母單雜交篩選實驗結果，構建酵母單雜的文庫至關重要，我們可以依據不同的實驗需要及物種特性，選擇不同的體系建庫方法，我們的技術專家可以熟練的應用Clonetech的SAMRT方法和life的gateway方法建立，同時，我們的技術專家也開發出了基于同源重組原理的建庫方法。

★ 酵母單雜交文庫構建實驗流程：
1. RNA提取
2. mRNA提取
3. cDNA的酶促法合成
4. cDNA連接接頭
5. cDNA按長度分離
6. cDNA與酵母單雜交文庫載體pGADT7進行all-direct重組
7. 重組產物電轉化
8. 文庫檢測以及質粒提取

★ 酵母單雜交文庫構建實驗材料要求：

客戶構建的酵母單雜交cDNA文庫，由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可：

細胞樣本：細胞數量大于1*10^7；

動物樣本：大于1g；

植物樣本：大于2g；

總RNA：大于200ug。

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