癌癥免疫治療的核心在于激活人體自身的免疫系統來識別和殺滅腫瘤細胞，而樹突狀細胞（DC）作為最重要的專職抗原呈遞細胞，能夠有效介導固有免疫應答并激活適應性免疫，其功能狀態還決定了免疫應答的強度與質量，因而在抗腫瘤免疫中處于核心地位。近年來研究發現，NLRP3炎性小體的激活可以誘導DC進入一種"超激活"的特殊狀態，超激活DC不同于NLRP3激活通常導致的細胞焦亡，能夠在分泌白細胞介素-1β的同時保持細胞活力，并上調共刺激分子表達，兼具更高效的抗原呈遞能力和更強的遷移能力，是促進CD8+ T細胞免疫應答的理想DC表型。然而，目前的DC超激活誘導方案仍普遍存在啟動信號安全性不足、激活信號組成復雜、刺激強度難以調控等問題，從而限制了其在腫瘤疫苗中的進一步應用。

針對以上問題，中國科學院上海硅酸鹽研究所陳航榕研究員、馬明研究員團隊構建了脂肪酸修飾并負載質粒DNA（pDNA）的脂質納米顆粒（FA-pLNP）平臺。其中，pDNA可編碼腫瘤抗原并提供NF-κB介導的NLRP3炎癥小體啟動信號；脂肪酸提供炎癥小體的激活信號，并通過調節信號強度實現了對DC超激活狀態的可控誘導。相關成果以"Combinatorial Design of Fatty Acid-Incorporated Plasmid Lipid Nanoparticles Drives Dendritic Cell Hyperactivation for Enhanced Cancer Immunotherapy"為題發表在《ACS Nano》上。

本研究以FDA批準的疫苗脂質組成與比例作為基準配方，引入四種不同碳鏈長度及飽和度的脂肪酸，分別按五個摩爾比梯度摻入，構建了包含20種候選配方的FA-pLNP庫（圖1）。以DC成熟度為篩選指標，最終篩選得到配方——摻入15%棕櫚酸的pLNP（命名為PA15）。

圖1. FA-pLNP超激活DC以增強癌癥免疫治療的示意圖。（a）通過混合含pDNA的水溶液與含多種脂質組分（包括脂肪酸）的乙醇溶液，合成FA-pLNP庫；（b）PA15通過pDNA引發NF-κB信號、棕櫚酸激活NLRP3炎癥小體，在引流淋巴結內促使DC成熟并呈遞抗原，從而誘導CD8+ T細胞反應，產生強效抗腫瘤免疫。

本研究基于團隊自主開發的螺旋聚焦流微混合器，實現了優選脂質納米顆粒PA15的穩定可控制備（圖2）。該微混合器采用摩方精密面投影微立體光刻（PμSL）3D打印技術（nanoArch® S140，精度：10 μm），一體化成型出具有3D同軸聚焦螺旋通道的復雜結構。含有脂質的乙醇溶液與含pDNA的水溶液分別從獨立入口注入，在螺旋通道內流動并進入混合區，兩相流體快速混合，促使脂質與pDNA在毫秒級時間內完成自組裝，從而獲得粒徑更均一的納米顆粒。此外，團隊以螺旋聚焦流微混合器為核心，開發了螺旋聚焦流納米藥物合成儀。該儀器配備觸屏數顯界面、微混合器連接件及自動收集臺，具有批次間高重復性、操作簡便等優勢，適用于納米脂質體、脂質納米顆粒等多種納米顆粒的高流速、均一化合成。

圖2.（a）螺旋聚焦流微混合器裝置示意圖；（b）裝置實物照片及核心混合區的顯微CT圖像；（c）混合區內流動模式示意圖；（d）螺旋通道出口處的橫截面視圖；（e）三種不同配方獲得的脂質納米顆粒的冷凍透射電鏡圖像；（f）通過動態光散射測得不同類型脂質納米顆粒的水合動力學粒徑分布。

進一步研究證實，在B16-OVA和MC38兩種小鼠腫瘤模型中，PA15顯著增強DC成熟與抗原呈遞，能從數量（增加比例）、質量（增強功能）和空間分布（促進浸潤）三個維度全面誘導強效的CD8? T細胞應答，腫瘤生長抑制率分別達到91.7%和74.1%（圖3為MC38小鼠腫瘤模型）。上述發現為癌癥疫苗及相關免疫治療的研究提供了新的思路。

圖3. PA15納米疫苗在皮下MC38腫瘤模型中的抗腫瘤免疫效果。（a）MC38腫瘤接種及疫苗接種流程示意圖；（b，c）接受指定治療方案的荷瘤MC38小鼠的個體腫瘤生長曲線和腫瘤抑制情況；（d）PA15顯著提升抗原特異性CD8+ T細胞的比例；（e）PA15處理后產生更高比例的細胞毒性CD8+ T細胞；（f）PA15處理后的瘤內IL-1β水平顯著上升。

上述研究成果系中國科學院上海硅酸鹽研究所與國科大杭州高等研究院的科研人員共同完成，研究生李孜印和賈福浩為共同第一作者，馬明研究員和陳航榕研究員為共同通訊作者。