水解氨基酸測定儀（全自動氨基酸分析儀）核心是離子交換色譜+茚三酮柱后衍生，用于蛋白質/多肽水解后17種常見氨基酸的定性定量。以下是完整、標準化使用說明（通用日立、賽默飛、島津等主流機型）。
一、開機前準備（關鍵）
1.環境與耗材檢查
環境：室溫20±2℃、濕度<70%、避光、無振動、穩壓電源。
氣體：高純N?（保護茚三酮、防氧化），壓力0.05–0.1MPa。
試劑（必須色譜純）：
洗脫緩沖液：pH2.2、3.3、4.0、6.4檸檬酸鈉體系（A/B/C/D液）
衍生劑：茚三酮（含乙二醇甲醚、SnCl?還原劑，現配現用、避光）
再生液：0.2mol/LNaOH、0.1mol/LHCl
標準品：氨基酸混合標準液（10–20nmol/μL）
耗材：
色譜柱：陽離子交換樹脂柱（如日立#2622）
保護柱、0.22μm水相濾膜、進樣瓶
2.試劑處理
緩沖液/茚三酮：0.45μm過濾+超聲脫氣15min。
氮氣吹掃試劑瓶，隔絕空氣。
3.儀器開機
開N?鋼瓶→開穩壓電源→開主機→開電腦→啟動軟件。
溫度設置：
柱溫：58–70℃（梯度程序）
反應池：130–135℃
泵排氣（Purge）：排除泵頭/管路氣泡。
系統平衡：
走起始緩沖液（pH2.2），基線平直、壓力穩定（3–5MPa）方可進樣。
二、樣品前處理（成敗關鍵）
1.酸水解（常規蛋白/多肽）
稱樣：固體樣品50–100μg，精確至0.01mg。
水解：
加6mol/LHCl（含0.1%苯酚）10mL
充N?3min→真空封管
110℃水解22–24h
趕酸：冷卻→取1mL→60℃真空蒸干
復溶：加pH2.2檸檬酸鈉緩沖液1–5mL溶解
過濾：0.22μm水相濾膜→進樣瓶待測
2.特殊氨基酸處理
色氨酸：酸水解全破壞→改用堿水解（4mol/LLiOH,110℃,24h）
半胱氨酸/蛋氨酸：易氧化→水解前過甲酸預處理
酪氨酸：酸穩定，常規水解即可
三、儀器參數設置（標準）
1.方法編輯
分離模式：梯度洗脫（pH/鹽濃度遞增）
流速：柱泵0.4–0.6mL/min；茚三酮泵0.2–0.3mL/min
進樣量：20μL
檢測波長：
主波長：570nm（α-氨基酸，如Asp、Thr、Ser、Glu、Pro等）
次波長：440nm（亞氨基酸，Pro）
運行時間：30–60min（依柱型）
2.序列設置
先跑標準品1–2針（校準保留時間、峰面積）。
再跑樣品，每20樣插1針標準品質控。
最后跑空白/沖洗液。
四、進樣與檢測
樣品瓶放入自動進樣器，編輯序列。
啟動運行，監控：
柱壓：3–5MPa，波動<±0.1MPa
基線：平穩、無漂移、噪聲<0.1mV
峰形：對稱、無拖尾、分離度>1.5
異常處理：
壓力高：保護柱/柱頭堵塞→更換或反沖
峰拖尾：柱老化→再生或換柱
無峰：茚三酮失效/漏液→重配、查管路
五、關機與維護（每日/每周/每月）
1.當日關機
跑完樣品→切換再生程序（0.2mol/LNaOH沖洗30min）。
再用保存液（pH6.4緩沖液）平衡30min。
關茚三酮泵→關柱溫/反應池→待降溫至<40℃關主機。
關N?→關電源。
清洗進樣針、進樣盤。
2.每周維護
更換保護柱芯。
清洗混合器、單向閥、過濾器。
檢查管路漏液、鹽析。
3.每月維護
校準波長、流速、溫度。
清洗反應盤管、檢測器流通池。
長期不用：10%甲醇沖系統，色譜柱密封保存。
六、速記SOP
配試劑→開機→平衡系統
樣品：酸水解→蒸干→復溶→過濾
進樣：先標樣→再樣品→質控
數據：定性→定量→報告
關機：再生→沖洗→降溫→斷電
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