細胞融合儀主流采用電融合原理,以下是通用標準化操作流程,適配多數常規型號的基礎使用需求。
一、實驗前準備
樣本預處理:將待融合細胞(如動物游離細胞、植物原生質體)用專用電融合緩沖液重懸,調整細胞密度至適宜范圍,避免雜質污染。
儀器檢查:確認設備電源、電極、輸出線路連接正常,提前開啟設備完成自檢,排查高壓脈沖發生器內阻是否符合標準。
融合池準備:選擇適配的電極(平型/針型等),將電極間距調整為1~1.5mm,向融合池中加入0.1~0.2ml細胞懸液,確保電極間無氣泡。
二、細胞融合儀核心參數設置
交流電場參數:將正弦頻率設置為1~1.3MHz,調整正弦電壓至5~10V,讓細胞在電場中逐步排列成點接觸狀態,避免過快形成串珠狀。
直流脈沖參數:根據細胞類型選擇脈沖寬度(常規0.1ms或10μs)、脈沖幅度(常規150V),脈沖頻率設置為1次/秒。
輔助參數:按需選擇自控/手控脈沖輸出模式,設置合適的閘門時間,常規實驗選擇“中”檔即可。
三、正式融合操作
將裝載好細胞懸液的融合池置于顯微鏡載物臺,接通儀器輸出電纜,用低倍鏡找到電極間的清晰視野。
打開交流輸出開關,觀察細胞排列狀態,微調電壓讓細胞兩兩接觸,避免過度聚集。
觸發直流融合脈沖,完成細胞膜可逆擊穿,誘導相鄰細胞完成融合,脈沖輸出時會伴隨提示音。
實驗結束后關閉所有輸出開關,依次關閉設備電源,及時清潔融合池與電極,做好設備維護。
四、關鍵注意事項
全程操作需在無菌環境下進行,避免細胞樣本被污染,影響后續培養存活率。
嚴格控制電壓與脈沖時長,參數過高會導致細胞膜不可逆擊穿,造成大量細胞死亡。
不同類型細胞需提前預實驗優化參數,保證融合效率與細胞存活率的平衡。
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