人源NK細胞通常定義為CD3- CD56+，還可以根據實驗需要加入CD19-（排除B細胞）、CD14/CD66b（排除單核/粒細胞）等。

同時根據CD56和CD16的表達密度，人外周血NK細胞可分為兩個主要功能亞群：

• CD56?????? CD16???/? （細胞毒功能弱）：約占10%，擅長分泌大量細胞因子，免疫調節功能強。

• CD56??? CD16? （強細胞毒性）：約占90%，構成主要細胞毒*隊，殺傷能力*強。

由于沒有CD56同源物，常用標志物取決于小鼠品系：

1. NK1.1： 最*用，但僅存在于C57BL/6、BALB/c、NOD等少數品系，在129、FVB等品系中不表達或表達極低。

2. CD49b (DX5)： 一種整合素，是跨品系的泛NK細胞標志物，但需要注意它在部分激活的T細胞上也有低表達，且在肝臟等組織駐留NK細胞上表達可能為陰性。

3. NCR1 (NKp46)：這是目前公*的在所有品系小鼠以及人類中都保守的NK細胞標志物，因此，CD3?NKp46?是鑒定小鼠NK細胞最嚴謹的方案。

   
   

同時，小鼠NK細胞還可以根據CD27（一種TNF受體） 和 CD11b（整合素αM，Mac-1） 的表達，區分其發育和功能差異，進而分為不同的亞群。

• CD11blowCD27low：這是NK細胞發育的最*階段。

• CD11blowCD27high：代表未成熟的NK細胞亞群。

• CD11bhighCD27high：這一亞群主要負責分泌細胞因子。

• CD11bhighCD27low：這是具有高細胞毒活性的成熟NK細胞亞群。

除了以上鑒定標志物外，也有一些細胞相應的功能標志物可以采用流式檢測。

CD69：首*早期指標，在NK細胞被細胞因子（如IL-2、IL-12、IL-15、IL-18）或靶細胞刺激后數小時內迅速表達，是判斷NK細胞是否進入活化狀態的“開關"性指標。

CD25：高親和力IL-2受體α鏈，在細胞因子（IL-2）刺激后顯著上調。是活化增殖的關鍵標志。

NKp44：活化NK細胞的經典受體標志，靜息NK幾乎不表達。常與CD56共標記以識別活化亞群。

CD107a（LAMP-1）：脫顆粒標志物，在NK細胞與靶細胞（如K562）共培養時，加入抗CD107a抗體直接到培養體系中。在脫顆粒過程中，CD107a會暴露在細胞膜上而被抗體結合。

IFN-γ：NK細胞功能中最核心、最*檢測的細胞因子，一個能產生高水平IFN-γ的NK細胞，不僅自身有殺傷力，還能有效協調整個免疫系統，是NK細胞多功能性的關鍵組成部分。

TNF-α：其通過與靶細胞上的TNF受體結合，激活Caspase級聯反應，直接誘導靶細胞凋亡，這是對穿孔素/顆粒酶途徑的補充。檢測TNF-α可幫助了解NK細胞是否啟用了穿孔素/顆粒酶之外的凋亡誘導途徑，有時可作為快速反應的指標，同時其與IFN-γ有*的協同作用，兩者結合能更有效地激活巨噬細胞，增強對腫瘤或感染細胞的清除。

顆粒酶B：一種絲氨酸蛋白酶，通過穿孔素形成的孔道進入靶細胞后，切割并激活凋亡通路的關鍵蛋白（如caspase），高效誘導靶細胞程序性死亡（凋亡），其存在和表達水平反映了NK細胞的殺傷潛能。

穿孔素：在靶細胞膜上聚合形成孔道，使水和離子通過，導致細胞腫脹破裂，并為顆粒酶進入創造通道，其存在和表達水平反映了NK細胞的殺傷潛能。

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