流式抗體使用濃度過高時，由于過高的使用濃度會大大提高非特異性結合的概率，這個在其他抗體應用實驗中也是很常見的非特異性結合原因。在使用抗體時，建議按照廠家的推薦使用濃度使用，也可以根據自身樣本和實驗需求，摸索最合適的抗體使用濃度以達到最*使用效果。同時注意，孵育時間過長也可能增加非特異性結合的概率哦，*好參考廠家指導的孵育時間。

抗體或染料分子可能通過疏水作用或靜電吸附與細胞膜、細胞骨架成分或其他蛋白非特異結合，這種黏附基本不分樣本不分蛋白。因此，在樣本洗滌液、封閉液或者抗體孵育液中通常含有胎牛血清或者BSA，以封閉這些位點盡量降低流式抗體非特異性黏附的可能。

許多免疫細胞（如巨噬細胞、單核細胞、B細胞）表面表達Fcγ受體，能與抗體的Fc段結合，導致抗體“粘"在非目標細胞上，這是檢測免疫細胞時產生大量假陽性的重要原因。因此需要在加入熒光抗體前，使用過量非特異性同源免疫球蛋白（如人用小鼠血清、人Fc阻斷劑、商品化Fc阻斷劑）或抗CD16/32抗體（針對小鼠樣本）封閉樣本的FC結合位點，降低因此產生的大量非特異性結合導致的假陽性。

若流式抗體本身未經嚴格驗證，特異性不足，可能會識別非目標抗原，那也會因此導致出現假陽性。因此，選擇經過嚴格驗證的特異性抗體對于實驗尤為重要，尚恩生物采用國內外高分文獻的克隆號抗體，抗體特異性、靈敏度、穩定性有據可查，從根源上保障實驗的順利進行，結果更可信。

某些熒光染料（尤其是串聯染料，如PE-Cy7、APC-Cy7）在光照或固定后易分解，產生游離的Cy染料，這些染料會非特異結合到任何蛋白上。因此在使用此類染料時應注意保存時間和溫度，如果可能的話盡量避免使用這種染料。尚恩生物提供流式抗體配色服務，由深耕流式領域十余年的資*技術為您提供*佳流式抗體配色服務和實驗指導，為您的實驗保駕護航。

洗滌液配方、洗滌次數、時間等也會一定程度影響非特異性吸附的產生，通過增加洗滌次數、時間并使用合適的洗滌緩沖液，可以有效去除未結合的抗體，從而減少非特異性結合的影響。

細胞死亡后會產生粘性物質，主要是泄露的DNA等物質可能吸附流式抗體導致假陽性。因此，在流式實驗時盡量使用活性高的新鮮組織或樣本，可以結合流式抗體熒光類型，選擇合適的細胞死活染料（Live/Dead dye） 在表面染色前進行標記，并在分析時將其排除。

▲SNK-028 SUNNCELL ® Violet 510(死活染料)

部分細胞檢測時，由于抗原存在于細胞內部，因此需要進行細胞固定和破膜以實現流式抗體進入細胞內部檢測，但固定破膜過程會暴露細胞內部大量非靶標抗原，因此直接檢測會經常出現背景升高的問題，因此大多會在破膜后使用含 permeabilization buffer（如含saponin）的洗滌/孵育緩沖液，并在需要的情況下在破膜后增加一步封閉。

▲SNAR-004 胞內因子固定破膜劑 (即用型)

尚恩生物流式抗體產品采用國內外高分文獻同樣克隆號的抗體為原料，進口熒光染料通過優化工藝高效標記，有效保障了流式抗體特異性、靈敏度、穩定性、熒光強度等基礎參數，實驗結果可重復性、認可度都同時得到保障，實際使用效果不差于進口品牌的同類產品。同時，尚恩生物提供的不僅僅是流式抗體產品，相應的專業配色、實驗操作、數據分析等全流程指導服務同步在線，有效保證實驗的順利進行。從產品到服務，尚恩生物均為您提供最*選擇，歡迎選購。