人骨肉瘤細胞的傳代方法通常包括準備、消化、終止消化、離心、重懸和分瓶等步驟，以下以常見的U2OS、HOS等細胞系為例進行說明：
 

　　一、傳代前準備
 

　　培養基和試劑：準備含有10%胎牛血清和1%雙抗(青霉素-鏈霉素)的完全培養基(如MEM、McCOY'S 5A等，根據細胞類型選擇)。同時準備不含鈣、鎂離子的PBS用于潤洗細胞，以及0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液用于消化細胞。
 

　　培養容器：根據細胞數量選擇合適的培養瓶(如T25、T75等)，并確保培養瓶無菌。
 

　　離心管：準備適量的15mL離心管用于離心細胞。
 

　　二、傳代步驟
 

　　棄去培養上清：從培養箱中取出培養瓶，棄去舊的培養上清液。
 

　　潤洗細胞：用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次，以去除殘留的培養基和血清，減少對消化效果的影響。
 

　　消化細胞：
 

　　加入適量的0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液(如T25瓶加入1-2mL，T75瓶加入2-3mL)，覆蓋細胞層。
 

　　將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，或在室溫下消化2-5分鐘(具體時間根據細胞類型和消化效果調整)。
 

　　在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，表明消化適度。
 

　　終止消化：
 

　　迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶使細胞完*脫落。
 

　　加入適量的完全培養基(如T25瓶加入3-4mL，T75瓶加入6-8mL)終止消化。
 

　　離心細胞：
 

　　將細胞懸液轉移至15mL離心管中。
 

　　在1000rpm條件下離心3-5分鐘，使細胞沉淀。
 

　　重懸細胞：
 

　　棄去上清液，補加1-2mL完全培養基重懸細胞沉淀。
 

　　輕輕吹打細胞使其分散均勻，避免產生氣泡損傷細胞。
 

　　分瓶傳代：
 

　　根據細胞密度和生長情況，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的培養瓶中。
 

　　每個新培養瓶中補充適量的完全培養基(如T25瓶加入5-8mL)，以保持細胞的生長活力。
 

　　繼續培養：
 

　　將培養瓶放入37℃、5% CO?的細胞培養箱中繼續培養。
 

　　定期觀察細胞生長情況，及時換液和傳代。
 

　　三、注意事項
 

　　消化時間：消化時間過長會導致細胞損傷或死亡，消化時間過短則細胞不易脫落。因此，在消化過程中應密切觀察細胞形態變化，及時終止消化。
 

　　離心條件：離心速度和時間應根據細胞類型和數量進行調整。過高的離心速度或過長的離心時間可能導致細胞損傷或死亡。
 

　　細胞密度：傳代時應根據細胞密度和生長情況選擇合適的傳代比例。細胞密度過低可能導致細胞生長緩慢或死亡，細胞密度過高則可能導致細胞接觸抑制或營養耗盡。
 

　　無菌操作：整個傳代過程應在無菌條件下進行，避免污染。操作前應洗手、消毒工作臺和培養瓶等物品。