操作流程:
1. 活化:
目的:激活填料表面的疏水基團,為樣品保留做好準備。
操作:加入 3~6 mL 甲醇,以 ≤1 mL/min 的流速緩慢通過柱床,確保填料被浸潤。
2. 平衡:
目的:用上樣溶劑替換甲醇環(huán)境,建立親水-疏水平衡體系。
操作:用 3~6 mL 超純水或緩沖液(pH 2-8)沖洗。注意:切勿讓柱床干涸后再進行上樣。
3. 上樣:
目的:使目標物與填料充分接觸并被保留。
操作:流速控制在 1~2 mL/min 以內(nèi),高流速可能導(dǎo)致回收率下降。樣品中有機相比例應(yīng) <10%,以避免目標物“穿透”。高鹽樣品需適當稀釋或添加緩沖液改善流動性。
4. 淋洗:
目的:去除基質(zhì)干擾物,同時保留目標物。
操作:常用 5% 甲醇水溶液或純水,淋洗體積一般為 3~5 mL。淋洗結(jié)束后可負壓抽干柱床,去除殘留水分。
5. 洗脫:
目的:將目標物從填料上解吸并收集。
操作:用 2~5 mL 甲醇或乙腈分次洗脫,流速控制在 0.5~1 mL/min。對于極性較強的化合物,可在有機相中添加 0.1% 甲酸或氨水以提高洗脫效率。
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