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TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒實驗流程
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒的實驗流程會根據樣本類型(細胞、石蠟切片、冰凍切片)略有差異，以下是通用標準化操作步驟，可直接參考執行。
一、TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒實驗前準備
試劑預處理：將試劑盒內各組分短暫離心，收集管底殘留液體，提前準備好PBS緩沖液、4%多聚甲醛固定液、通透劑等配套耗材。
樣本預處理：根據樣本類型完成基礎處理，貼壁細胞用PBS輕洗1次，石蠟切片完成二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化。
二、固定與通透
固定：用4%多聚甲醛室溫固定樣本30~60分鐘，之后用PBS洗滌1~2次。
通透：加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分鐘；石蠟切片可改用20μg/mL的蛋白酶K，37℃孵育15~30分鐘，之后用PBS充分洗滌3次，避免殘留酶干擾后續反應。
三、標記反應
平衡：滴加TdT Equilibration Buffer覆蓋樣本，37℃濕盒中平衡10~30分鐘。
配制檢測液：按比例混合TdT酶與熒光標記液，現配現用，單次用完不可凍存。
孵育標記：每個樣本滴加50μL TUNEL檢測液，放入濕盒中37℃避光反應60分鐘，避免反應液蒸發。
四、復染與觀察
洗滌：用PBS充分洗滌樣本3次，每次5分鐘，去除未結合的標記液。
復染封片：滴加DAPI工作液室溫避光孵育5分鐘，用含抗熒光淬滅劑的封片劑完成封片。
檢測拍照：熒光顯微鏡下選擇對應激發/發射波長觀察，綠色熒光用450~500nm激發、515~565nm發射通道，完成圖像采集。
五、陽性對照設置
滴加100μL 1X DNase Buffer到已通透的樣本上，室溫平衡5分鐘。
滴加DNase工作液37℃孵育10分鐘，人為誘導DNA斷裂，后續按正常流程完成標記，可驗證實驗體系有效性。
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