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| 應用領域 | 醫療衛生,環保,生物產業 |
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肌動蛋白染色體免疫檢測載體
肌動蛋白染色體免疫檢測載體 細胞周期染色體
活細胞內的抗體檢測
一種追蹤活細胞中肌動蛋白動力學的非侵入性方法
用于檢測活細胞中肌動蛋白的新工具 Actin Chromobody 可讓您實時監測細胞骨架或細胞核的組裝或拆卸。Chromobody 的小尺寸為令人驚嘆的高分辨率圖像或細胞骨架動力學的延時電影產生高信噪比。令人驚訝的是,它對肌動蛋白動力學沒有影響,并且對大多數細胞類型表現出極低的毒性。只需使用 Actin Chromobody 質粒轉染您選擇的細胞系。該質粒包含與 TagRFP 或 TagGFP (Evrogen) 融合的肌動蛋白特異性羊駝抗體序列。轉化后,您的細胞將表達肌動蛋白染色體。當熒光 Chromobody 分子特異性定位于肌動蛋白時,細胞的細胞骨架或細胞核就會亮起。瞬時結合不會影響細胞活力或運動性,因此為您提供了觀察細胞中細胞骨架或細胞核的*可能性。使用 Actin-Chromobody 靶向和追蹤您感興趣的細胞系中的微絲,或作為細胞形態的標記物,或作為細胞運動的探針。
使用 Actin Chromobody 實時可視化肌動蛋白動力學
Actin Chromobody 揭示了活細胞中的肌動蛋白動力學。在用 2 µM Cytochalasin D 處理 1 小時并恢復 2 小時后,使用共聚焦顯微鏡對 HeLa 細胞進行成像。延時分析顯示肌動蛋白重組。

Actin Chromobody 突出顯示各種細胞系中的微絲。顯示的是用與 TagRFP 或 TagGFP 融合的肌動蛋白 Chromobody 轉染的細胞的熒光圖像。


用核肌動蛋白染色體(TagGFP2,綠色)和核纖層蛋白染色體(TagRFP2,紅色)轉染的 NIH 3T3 細胞(鼠成纖維細胞)在無血清培養基中饑餓 24 小時。用血清刺激后 30 秒顯示了核肌動蛋白-染色體探測的內源性 F-肌動蛋白組裝和分布。
核肌動蛋白-Chromobody 質粒已由德國馬爾堡大學 BPC 藥理學研究所的 Robert Grosse 教授在 ChromoTek 的許可下發表和描述:
Matthias Plessner、Michael Melak、Pilar Chinchilla、Christian Baarlink、Robert Grosse (2015)。細胞擴散后核 F-肌動蛋白的形成和重組J Biol Chem。
納米抗體是*的小抗體片段,可與靶蛋白非常有效地結合。在動物細胞中表達的納米抗體可以被收集并用于體外研究。當納米抗體被表達為與 GFP 等報告分子的融合體時,發生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細胞內的目標結合。此外,使用正確的載體和啟動子,結合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質融合提供了一個
非常好的替代方案,用于免疫定位研究。為什么?因為 GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變融合蛋白的活性。相比之下,

被稱為駱駝科的動物家族(駱駝、美洲駝和羊駝)產生沒有輕鏈的功能性抗體,即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過單個可變結構域識別并結合其抗原。當從它們的羧基尾部切下時,這些桶狀結構 (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內的親和力和亞納摩爾范圍內的解離常數(通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍)的特點。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達 70°C 的溫度下極為穩定,即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發揮作用。這些小而*的抗體片段可用于各種*的應用。他們將打開您的研究可能性。
規格 | |
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| 零件號 | ACBRFP、ACBGFP、acg、acr |
| 向量類型 | 編碼與綠色熒光蛋白 TagGFP2 或 TagRFP 融合的細胞骨架標記肌動蛋白-V H H 或核標記 VHH的哺乳動物表達載體 |
| 目標分子 | 肌動蛋白 |
| 記者 | TagGFP2 或 TagRFP(來自 Evrogen) |
| 宿主細胞 | 哺乳動物 |
| 轉染方法 | 通過任何已知的轉染方法轉染哺乳動物細胞。如果需要,可以使用 G418 [Gorman 1985] 選擇穩定的轉化子 |
| 在大腸桿菌中繁殖 | DH5alpha、HB101、XL1-Blue 和其他通用菌株 與 pMB1/ColE1 不兼容 |
| 選擇 | 原核生物——卡那霉素 真核生物——新霉素(G418) |
| 復制 | 原核生物——pUC ori 真核生物——SV40 ori |
| 采用 | 內源性細胞骨架或細胞核的無創活細胞可視化 |
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