隨著CRISPR基因編輯、RNA研究、細胞治療和蛋白功能的研究不斷進步,實驗室對外源分子遞送技術的需求也在發生變化。
以前我們更多的關注的是這樣一個問題:
能不能把東西送到細胞里去?"
而現在我們一般還要繼續追問:
每次能不能穩定地送進去呢?"
不同批次之間是否有可比性?"
“如果實驗出現異常情況的話,可以找出其中的原因嗎?""
因此,在越來越多有關基因編輯、細胞功能的研究項目的進行當中,電轉染設備的重復性和數據記錄能力變得越來越重要。
## 由單一的實驗走向項目的開展,實驗的標準也要隨之改變
如果是第一次預實驗的話,研究者可以根據需要不斷地修改參數,直到得到滿意的結果為止。
但是當項目進入到正式的研究階段,特別是涉及到多個批次的細胞、多個實驗組別或者多人合作的時候,僅僅依靠個人的操作經驗和無法保證結果的一致性。
比如在不同的基因編輯實驗批次中,如果脈沖過程有所不同,那么最后得到的編輯效率、細胞恢復狀況以及之后的表型分析都會受到一定的影響。
此時,電轉染儀已經不能僅僅是一個簡單的高壓脈沖發生器了,它應該成為整個實驗的質量控制系統中的一員。
## 輸出的實際參數值有什么意義呢?
在科研實驗中,“設定參數"和“實際發生參數"這兩個概念是不一樣的。
研究者所設定的目標條件,并不是直接作用于樣本上的,而是經過設備輸出之后才產生的實際電脈沖。
V-leader 威尼德 Gene Pulser 630 配置電脈沖參數檢測與記錄系統,可以實時顯示脈沖波形,并且能夠記錄下實際電壓、脈沖時間、脈沖間隔以及脈沖次數等信息。
這樣的數據就可以和實驗的結果一一對應了。
例如:
某一個實驗組編輯效率明顯下降,并且可以回看脈沖狀態;
某一類細胞的死亡率上升了,可以通過比較不同批次的實際輸出參數來得出結論;
不同的操作人員使用相同的方案的時候,也可以判斷出實驗執行條件是否一直相同。
可追溯性可以為建立標準的操作程序提供實際的幫助。
基因編輯除了要保證效率之外,還需要細胞可以繼續進行接下來的實驗
以CRISPR相關的實驗為例,不管導入的是質粒、RNA或者其他分子的形式,轉染本身一般只占整個實驗過程的一半左右。
之后還會涉及到:
細胞恢復培養;
單克隆篩選;
基因型鑒定;
蛋白表達檢測;
功能實驗;
表型分析。
因此,在轉染過程中對細胞的狀態產生過大的影響時,即使短期內導入效率高,也會提高以后實驗的難度。
指數衰減波電穿孔技術利用短時間的電脈沖來使細胞膜發生可逆性的通透性改變,從而為DNA、RNA、蛋白質等外源分子的傳遞提供了一個物理通道。
當參數適當的時候,在分子遞送效率和細胞狀態之間可以進行優化。
這也是電轉染在很多基因編輯的研究中有著重要的應用價值的原因之一。
多樣本項目的設備要具有統一的平臺能力
實際上科研項目不會一直只用一種細胞。
今天可以進行細菌轉化實驗,明天則要對哺乳動物細胞進行處理,之后還需要建立起植物原生質體轉化系統。
每一個樣本都必須配備一套不同的設備的話,將會使實驗室管理工作、人員培訓和方法轉移變得更加復雜。
Gene Pulser 630 可以對細菌、酵母、哺乳動物細胞、植物細胞以及植物原生質體等多種類型的樣本進行電穿孔實驗,并且針對常用的樣本提供了相應的預設和參數調節方案。
對于綜合性實驗室來說,一個平臺能夠涵蓋多種電轉的應用,這樣就可以減少不同實驗之間的方法遷移的成本。
對于科研項目而言,可以重復要比偶然出現一次高效率更重要
很多實驗結果問題并不是真的“做不出來",而是在于“這次做出來了,下次又重復不出來"。
特別是在研究要形成論文數據、建立標準方法或者繼續推進產業化驗證的時候,可重復性的意義就會越來越大。
就客戶的使用情況而言,我們更希望電轉染設備可以做到以下三點:
參數可以被正確地設定;
實驗的過程可以真實的被記錄下來;
異常結果可以找到分析依據。
V-leader 威尼德 Gene Pulser 630 將指數衰減波電穿孔、脈沖波形顯示、參數記錄、樣品電阻檢測以及異常放電保護整合到同一平臺中。
對于基因編輯、細胞功能驗證和長期項目化的研究來說,該設計的主要價值并不是為了增加幾個儀器的功能,而是在于使原來需要高度的操作經驗來完成的電轉染過程,最終發展成為能夠進行標準化、數據化的管理的實驗步驟。
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