在進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的時(shí)候，很多實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)形成了比較成熟的方案。

但是當(dāng)研究對(duì)象換成了原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞或者其它比較難以轉(zhuǎn)化的細(xì)胞時(shí)，情況就會(huì)發(fā)生變化。

原來的實(shí)驗(yàn)方法效果降低，條件摸索的時(shí)間變長了，實(shí)驗(yàn)人員開始尋找新的技術(shù)方案。這也是很多客戶開始接觸細(xì)胞電轉(zhuǎn)儀的原因。

“難轉(zhuǎn)染"為什么就成了實(shí)驗(yàn)中的一大難題呢？

對(duì)科研人員來說，最頭疼的事情并不是做一次實(shí)驗(yàn)就失敗了，而是一個(gè)實(shí)驗(yàn)的方法一直不能夠穩(wěn)定的建立起來。

特別是那些稀有的原始細(xì)胞樣本，在采集的過程中就耗費(fèi)了大量的時(shí)間與金錢。每次實(shí)驗(yàn)都必須用到很多細(xì)胞來進(jìn)行條件摸索的話，整個(gè)課題的研究進(jìn)度就會(huì)受到干擾。

很多客戶在詢問細(xì)胞電轉(zhuǎn)儀的時(shí)候，都會(huì)提到類似的情況：

常規(guī)轉(zhuǎn)染的方法已經(jīng)做過實(shí)驗(yàn)了，但是效果并不好；

實(shí)驗(yàn)材料很寶貴，希望盡量避免多次嘗試錯(cuò)誤；

要引入某種特定的核酸分子；

要考慮到以后的細(xì)胞培養(yǎng)或者功能實(shí)驗(yàn)；

課題組之前沒有類似的經(jīng)驗(yàn)，希望能夠得到一些幫助來建立最初的條件。

對(duì)于這樣的需求來說，設(shè)備本身當(dāng)然很重要，但是更重要的還是有沒有適合這個(gè)細(xì)胞的應(yīng)用思路。

二、為什么細(xì)胞電轉(zhuǎn)會(huì)成為一種備選方案？

細(xì)胞電轉(zhuǎn)主要是用電脈沖來暫時(shí)改變細(xì)胞膜的通透性，從而為目標(biāo)分子進(jìn)入細(xì)胞創(chuàng)造條件。

相比一些依靠細(xì)胞內(nèi)自身攝取方式的方法而言，電轉(zhuǎn)提供了一種另外的分子遞送思路，在很多細(xì)胞的研究場(chǎng)景下都受到了重視。

但是要說明的是：

“可以做電轉(zhuǎn)"并不等同于“不需要優(yōu)化"。

不同的細(xì)胞對(duì)于電脈沖的耐受能力是不一樣的，不同的實(shí)驗(yàn)對(duì)于結(jié)果的要求也是不一樣的。

有的課題會(huì)先考慮陽性的比例，而有的課題則更注重電轉(zhuǎn)之后的細(xì)胞恢復(fù)以及后續(xù)的功能。

所以在做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，要根據(jù)具體的科研目的來調(diào)節(jié)。

三、選擇細(xì)胞電轉(zhuǎn)儀，最好是自己體內(nèi)的細(xì)胞來提問

如果是研究比較特殊的一種細(xì)胞的話，在選擇型號(hào)的時(shí)候最有價(jià)值的問題并不是：

你們?cè)O(shè)備的最大電壓是多大？"

而是：

我們的這個(gè)細(xì)胞是不是也做過類似的用途呢？"

沒有一樣的案例，有沒有相似的細(xì)胞來借鑒呢？"

第一次測(cè)試建議設(shè)置幾個(gè)條件？"

當(dāng)細(xì)胞的狀態(tài)變差之后，接下來應(yīng)該先改善哪一方面的情況呢？"

“我這個(gè)樣本很寶貴，可以先用少量的細(xì)胞做條件篩選嗎？""

這些情況更加貼近實(shí)際的實(shí)驗(yàn)，并且也容易去評(píng)價(jià)一個(gè)供應(yīng)商的技術(shù)支持能力。

四、對(duì)于珍貴樣本，減少盲目試錯(cuò)更加重要

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中存在一個(gè)實(shí)際的問題，那就是樣本費(fèi)用。

相比于能夠不斷培養(yǎng)擴(kuò)增的常規(guī)細(xì)胞系而言，部分原代樣本的數(shù)量比較少，在進(jìn)行每次條件篩選的時(shí)候都會(huì)消耗大量的細(xì)胞，這樣就會(huì)給實(shí)驗(yàn)人員帶來很大的壓力。

所以在正式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，可以先和細(xì)胞電轉(zhuǎn)儀的技術(shù)人員溝通，盡量弄清楚：

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)；

優(yōu)先評(píng)價(jià)指標(biāo)；

計(jì)劃檢測(cè)時(shí)間；

可以用來進(jìn)行優(yōu)化的細(xì)胞數(shù)目；

估計(jì)一次處理的樣本數(shù)量。

這樣做并不是為了達(dá)到“一次成功"的效果，而是盡可能地使每次實(shí)驗(yàn)都具有明確的目的。

第一輪主要是確定大致適用范圍，第二輪再進(jìn)一步比較轉(zhuǎn)染效果和細(xì)胞狀態(tài)。

與無目的地不斷修改參數(shù)相比，這樣一種方式更能幫助我們建立起自己的實(shí)驗(yàn)流程。

五、科研客戶的真正需求是有一套可以重復(fù)使用的辦法

購買了細(xì)胞電轉(zhuǎn)儀之后，最后使用的設(shè)備應(yīng)該為具體的課題服務(wù)。

有一次實(shí)驗(yàn)意外地得到了比較好的結(jié)果，但是下次就無法再得到同樣的結(jié)果了，這樣的結(jié)果對(duì)于長期從事科研工作的人的價(jià)值仍然不大。

因此，在選擇細(xì)胞電轉(zhuǎn)儀以及進(jìn)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的時(shí)候，可以同時(shí)考慮到以下幾點(diǎn)：

操作流程是否可以被標(biāo)準(zhǔn)化；

參數(shù)是否好記、好用；

不同的人員在操作的時(shí)候會(huì)不會(huì)很容易地保持一致；

耗材供應(yīng)是否穩(wěn)定；

之后換上其他類型的細(xì)胞的時(shí)候是不是可以繼續(xù)擴(kuò)展它的應(yīng)用范圍。

對(duì)于科研平臺(tái)或者要同時(shí)為幾個(gè)課題組服務(wù)的實(shí)驗(yàn)室來說，這些問題就更加重要了。

六、正在做難轉(zhuǎn)染細(xì)胞，可以先咨詢后測(cè)試

如果目前正在進(jìn)行原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞等比較難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的工作，并且正在尋找一個(gè)合適的細(xì)胞電轉(zhuǎn)方案的話，那么可以把具體的實(shí)驗(yàn)需求整理一下。

在進(jìn)行咨詢的時(shí)候可以直接說明：

細(xì)胞名稱+樣本來源+目的分子+目前的方法+目前的結(jié)果+最希望得到改進(jìn)的指標(biāo)。

例如：

現(xiàn)在正在做原代免疫細(xì)胞，希望能夠?qū)雖RNA，但是現(xiàn)有的方法陽性率不固定，另外也希望盡量保持后續(xù)細(xì)胞的狀態(tài)。"

這樣描述的方式可以使得技術(shù)員們更容易地去理解需求，并且能夠判斷出應(yīng)該從設(shè)備選型、參數(shù)設(shè)置還是整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程入手。

不如在購買設(shè)備之前把實(shí)驗(yàn)的問題說清楚。

如果有的細(xì)胞正在進(jìn)行轉(zhuǎn)染，請(qǐng)直接提供細(xì)胞名稱和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，詢問?xì)胞電轉(zhuǎn)儀的應(yīng)用方案以及最初的測(cè)試思路。