進行免疫細胞電轉(zhuǎn)實驗時，不少研究人員都遇到過類似的問題：

某套電轉(zhuǎn)條件用于T細胞時，轉(zhuǎn)染效率和細胞狀態(tài)都比較理想；但換成NK細胞以后，相同或者相近的條件卻可能出現(xiàn)不同的結(jié)果。

事實上，這是一種非常正常的現(xiàn)象。

因為所謂的“免疫細胞"并不是一種細胞，而是由多種具有不同生物學特點的細胞組成。

因此，理解免疫細胞電轉(zhuǎn)的第一步，就是不能把不同免疫細胞簡單看成相同的轉(zhuǎn)染對象。

不同免疫細胞為什么不能直接套用相同條件？

T細胞和NK細胞雖然都屬于淋巴細胞，但在細胞功能、激活方式、培養(yǎng)體系、代謝狀態(tài)以及對外界刺激的響應(yīng)方面都存在差異。

即使同屬于T細胞，不同亞型、不同激活階段以及不同培養(yǎng)時間下的細胞狀態(tài)也并不一致。

而電轉(zhuǎn)本身又與細胞膜狀態(tài)、細胞大小、生理狀態(tài)以及胞內(nèi)環(huán)境密切相關(guān)。

因此，一個在某種T細胞上表現(xiàn)良好的電轉(zhuǎn)條件，不一定適合NK細胞。

同樣，一個適合mRNA遞送的條件，也未必適合質(zhì)粒DNA或者CRISPR/Cas9 RNP。

真正需要優(yōu)化的，其實是：

細胞類型+細胞狀態(tài)+遞送載荷+電轉(zhuǎn)體系的組合。

為什么T細胞電轉(zhuǎn)研究比較常見？

T細胞是目前免疫細胞工程和細胞治療研究中非常重要的一類細胞。

無論是CAR-T、TCR-T，還是利用CRISPR對T細胞進行基因編輯，都涉及細胞工程化改造。

因此，如何高效地將mRNA、DNA或者基因編輯復(fù)合物送入T細胞，是很多研究項目需要解決的問題。

電轉(zhuǎn)在這類研究中具有明顯優(yōu)勢。

例如，可以把mRNA直接遞送進入T細胞，使目標蛋白獲得相對快速的瞬時表達；也可以將CRISPR/Cas9 RNP直接送入細胞，從而開展特定基因敲除或者進一步的功能研究。

不過，即使是T細胞，也不存在一套適用于所有實驗的固定條件。

不同的細胞來源、激活狀態(tài)、培養(yǎng)天數(shù)和遞送分子，都可能改變最終電轉(zhuǎn)效果。

NK細胞電轉(zhuǎn)為什么常常更需要優(yōu)化？

NK細胞近年來在腫瘤免疫和細胞治療領(lǐng)域受到越來越多關(guān)注。

CAR-NK、基因編輯NK細胞、NK細胞功能增強等研究方向，都涉及不同程度的細胞工程化。

與此同時，NK細胞胞內(nèi)遞送也成為技術(shù)開發(fā)中的重要問題。

研究人員可以通過mRNA電轉(zhuǎn)讓NK細胞短期表達特定受體或者功能蛋白，也可以通過CRISPR/Cas9 RNP電轉(zhuǎn)進行基因編輯。

但對于NK細胞來說，僅僅證明“東西能夠轉(zhuǎn)進去"通常并不夠。

電轉(zhuǎn)之后還需要進一步觀察：

細胞是否能夠正常恢復(fù)？

細胞數(shù)量是否出現(xiàn)明顯損失？

后續(xù)擴增是否受到影響？

細胞表型是否改變？

原有殺傷功能是否能夠保持？

這也是為什么NK細胞電轉(zhuǎn)優(yōu)化通常需要同時兼顧多個評價維度。

同一種細胞，不同狀態(tài)也可能得到不同結(jié)果

原代免疫細胞不是固定不變的實驗材料。

剛剛分離出來的細胞、經(jīng)過激活的細胞以及擴增幾天后的細胞，在細胞大小、膜狀態(tài)、代謝水平以及生理功能方面都可能發(fā)生變化。

因此，即使實驗使用的是同一種細胞，如果前處理流程發(fā)生改變，電轉(zhuǎn)結(jié)果也可能出現(xiàn)明顯差異。

很多實驗中出現(xiàn)的“同樣參數(shù)、不同批次結(jié)果不一致"，未必來自電轉(zhuǎn)設(shè)備或者參數(shù)本身。

還應(yīng)該關(guān)注：

細胞來源是否一致？

細胞培養(yǎng)時間是否一致？

激活方式是否一致？

電轉(zhuǎn)前細胞狀態(tài)是否良好？

細胞密度是否穩(wěn)定？

電轉(zhuǎn)后恢復(fù)條件是否相同？

從這個角度來看，免疫細胞電轉(zhuǎn)的重復(fù)性實際上反映的是整個細胞處理流程的穩(wěn)定性。

與其尋找萬能參數(shù)，不如尋找合適的工藝窗口

進行T細胞電轉(zhuǎn)或者NK細胞電轉(zhuǎn)時，很多人第一反應(yīng)是尋找別人使用過的參數(shù)。

參考已有方案當然非常重要，但更重要的是建立“工藝窗口"思維。

所謂工藝窗口，就是找到一個能夠同時兼顧遞送效率和細胞狀態(tài)的范圍。

如果條件太弱，目標分子進入細胞的效率可能不足。

如果條件太強，又可能影響細胞存活、恢復(fù)甚至后續(xù)功能。

因此，優(yōu)化的目標不是追求某一個單獨參數(shù)，而是尋找適合當前實驗?zāi)康牡钠胶鈪^(qū)域。

在開始優(yōu)化之前，可以先明確幾個問題：

使用的是哪一種免疫細胞？

細胞目前處于什么狀態(tài)？

需要遞送的是mRNA、DNA還是RNP？

最終目標是觀察短期表達，還是獲得長期培養(yǎng)的工程化細胞？

后續(xù)是否需要擴增和功能實驗？

這些問題越明確，電轉(zhuǎn)優(yōu)化就越有方向。

所以，T細胞和NK細胞雖然都可以進行電轉(zhuǎn)，但并不存在真正意義上的“通用參數(shù)"。

理解細胞本身的差異，并針對具體實驗建立合適的工藝窗口，才是做好免疫細胞電轉(zhuǎn)的核心。