BHQ-2 NHS，也稱為黑洞猝滅劑-2 N-羥基琥珀酰亞胺酯（Black Hole Quencher-2 N-Hydroxysuccinimide Ester），是一種結合了黑洞猝滅劑-2（BHQ-2）和N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS ester）功能的化合物，在分子生物學和生物醫學研究中具有重要應用。

一、化學結構與性質

• 分子式：C??H??N?O?

• 分子量：603.59

• 外觀：深紫色粉末

• 溶解性：易溶于有機溶劑（如DMSO、DMF），難溶于水。

• 儲存條件：避光、密封、-20℃干燥保存，嚴禁反復凍融，否則會導致活性酯水解和試劑降解。

結構式：

二、功能特性

• 高效熒光淬滅：BHQ-2 NHS具有覆蓋550–650nm范圍的寬帶吸收光譜，可與多種綠色、黃色及橙紅色熒光染料形成高效FRET對，如Cy3、TAMRA、ROX、Alexa Fluor 555/568等。它通過非輻射能量轉移機制高效耗散熒光團的激發能量，幾乎不發射熒光，從而顯著降低背景噪音，提高實驗信噪比。

• 氨基特異性偶聯：BHQ-2 NHS的NHS活性酯基團在中性至弱堿性環境（pH 7.0–8.5）下，能與蛋白質、寡核苷酸、抗體等生物分子的伯氨基（-NH?）快速反應，形成穩定的酰胺鍵，實現淬滅基團的定點修飾。這種反應具有高度的特異性和敏感性，使得BHQ-2 NHS在生物分析、藥物研發和疾病診斷等領域具有廣泛的應用前景。

• 化學穩定性：BHQ-2核心結構化學穩定性優異，耐酸、耐溫和耐光漂白性強，標記后的生物分子可在常規儲存條件下保持活性。

三、應用領域

• FRET體系構建：BHQ-2 NHS可作為能量受體或熒光猝滅劑，與熒光供體形成高效FRET體系，用于蛋白質構象變化、酶活性分析和分子相互作用研究。

• 熒光淬滅探針：通過氨基偶聯構建可控淬滅的熒光探針，實現信號調控和高靈敏度檢測。例如，在實時熒光定量PCR（qPCR）中作為探針3'端或中間位置的淬滅基團，確保熒光僅在擴增過程中被釋放。

• 蛋白質及多肽標記：BHQ-2 NHS可與巰基修飾蛋白、抗體或多肽共價結合，實現生物標記和分子追蹤。例如，用于免疫沉淀、免疫組化、細胞染色實驗等。

• 分子成像與生物傳感：通過與肽、抗體偶聯，BHQ-2 NHS可用于構建“關-開"型熒光探針，實現特定酶活性、代謝物或信號分子的動態檢測。

• 多重檢測與高通量分析：由于其吸收范圍覆蓋多種熒光波段，BHQ-2 NHS非常適合復雜樣品的多目標檢測體系。

• 藥物篩選：與底物偶聯形成熒光淬滅底物，BHQ-2 NHS可用于實時監控酶抑制活性，助力藥物研發。

四、操作注意事項

• 偶聯反應條件：偶聯反應通常在中性至弱堿性緩沖液中進行，以保持NHS活性。避免長時間暴露于水或強酸堿環境，以防官能團水解或分解。

• 儲存與運輸：BHQ-2 NHS需避光、密封、-20℃干燥保存，嚴禁反復凍融。運輸過程中也需保持低溫、避光，防止降解。

• 安全防護：BHQ-2 NHS僅供科研使用，不可用于人體或動物實驗。操作時需佩戴手套和護目鏡，避免吸入或接觸皮膚。

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