BHQ-3 NHS 是一種高效的熒光淬滅劑，屬于黑洞淬滅劑（Black Hole Quencher, BHQ）系列，專為生物分子偶聯設計，廣泛應用于熒光探針構建、分子診斷、生物成像及藥物研發等領域。

一、化學結構與特性

1. BHQ-3核心：

• 具有寬帶吸收光譜（620–730 nm），覆蓋紅光至近紅外區域，可高效淬滅Cy5、Alexa Fluor 647、ROX等熒光染料的信號。

• 核心為高度共軛的芳香雜環結構，無自發熒光，通過非輻射能量轉移（如FRET和PET機制）高效耗散熒光團激發能，避免信號干擾。

2. NHS酯基團：

• N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS ester）是生物標記反應中常用的活化基團之一，能夠與生物分子中的伯胺（-NH?）反應，生成穩定的酰胺鍵，實現定向共價偶聯。

• 在中性至弱堿性條件（pH 7.5–8.5）下與伯胺快速反應，反應效率高且生成穩定的酰胺鍵，適用于寡核苷酸、蛋白質、多肽或功能性小分子偶聯。

結構式：

二、物理性質

• 外觀：深紫色或深藍色至藍黑色固體粉末。

• 分子式：C??H??N?O??。

• 分子量：644.76。

• 溶解性：易溶于DMSO、DMF、乙腈等有機溶劑；水溶性有限，通常需在有機溶劑中配制后使用。

• 穩定性：固態下避光低溫（-20℃）保存可長期穩定；溶液狀態易水解，需現配現用。

三、主要功能與應用

1. 熒光淬滅：

• BHQ-3 NHS可有效淬滅近紅外熒光染料的信號，降低背景噪音，提高信噪比，顯著提升檢測靈敏度。

2. 分子探針構建：

• 常用于標記寡核苷酸探針，如TaqMan探針、分子信標等，通過熒光信號檢測目標基因的表達水平。

• 在FRET探針中，BHQ-3 NHS作為淬滅基團，與熒光報告基團配對，實現信號調控。

3. 生物成像：

• 與紅光或近紅外熒光染料配合，用于體內深層成像、腫瘤靶向探針、酶活性探測等。

4. 藥物研發：

• 用于藥物分子的標記，以監測藥物在體內的分布、代謝和藥效。

5. 實時PCR：

• BHQ-3標記的寡核苷酸可用于實時PCR的雙標記熒光探針，有效抑制熒光背景信號，提高檢測的靈敏度和準確性。

四、性質

• 高效淬滅：淬滅效率高，接近99%，能顯著降低背景噪聲。

• 特異性標記：NHS酯基團可與生物分子中的伯胺特異性反應，生成穩定的酰胺鍵，實現定向共價偶聯。

• 寬吸收譜：覆蓋620–730 nm，適配多種近紅外熒光染料。

• 光穩定性：核心結構耐光漂白，適用于長時間熒光檢測。

• 生物相容性：在生物體內表現出良好的相容性，不會對細胞或生物體產生明顯的毒性或副作用。

五、儲存條件

• 避光、-20℃以下密封干燥保存，避免反復凍融。

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