一、基本信息

CY5-Rhein，中文名CY5標(biāo)記大黃酸，英文名Cyanine 5-labeled Rhein或CY5-conjugated Rhein。它是一種通過化學(xué)方法將近紅外熒光染料CY5與天然蒽醌類化合物大黃酸（Rhein）共價偶聯(lián)形成的熒光標(biāo)記化合物，主要用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

大黃酸（Rhein）是一種天然來源的蒽醌類化合物，具有多羥基蒽醌骨架，化學(xué)穩(wěn)定性良好，生物相容性高，具有顯著的抗氧化、抗炎和細(xì)胞活性調(diào)節(jié)作用。

CY5（Cyanine 5）是一種常用的花菁類熒光染料，最大吸收波長約650 nm，最大發(fā)射波長約670 nm，位于近紅外（NIR）區(qū)域。近紅外光比可見光能更深入地穿透生物組織，且生物樣本在近紅外區(qū)的自發(fā)熒光較弱，信噪比高，靈敏度優(yōu)異。

外觀為深色固體粉末，純度通常≥95%（HPLC驗證）。存儲條件為-20°C以下、避光、干燥、密封保存，建議充惰性氣體保護(hù)。

二、結(jié)構(gòu)與連接方式

CY5-Rhein的合成通常在溶劑體系如DMF或DMSO中進(jìn)行。CY5-NHS酯與大黃酸在溫和條件下反應(yīng)即可形成穩(wěn)定的共價鍵。大黃酸分子上的羧基或羥基作為反應(yīng)位點，通過一個化學(xué)連接臂（Linker）與CY5染料上的活性基團(tuán)（如NHS酯）共價連接，形成穩(wěn)定的酰胺鍵或酯鍵。

連接臂的設(shè)計旨在盡量減少對大黃酸原有生物活性的影響，同時保持CY5的熒光效率。通過HPLC與質(zhì)譜分析可確認(rèn)產(chǎn)物純度與結(jié)構(gòu)特征。光譜測試顯示出明顯的雙吸收峰，分別來源于蒽醌骨架與CY5染料部分，說明兩者的電子體系發(fā)生了部分耦合。

三、核心光學(xué)特性

CY5-Rhein繼承了CY5染料的優(yōu)異近紅外熒光特性：

激發(fā)波長約650-660 nm，發(fā)射波長約670-680 nm，位于近紅外光譜區(qū)。這一區(qū)域生物組織的自身熒光背景極低，光的穿透性好，適合活體成像和深層組織觀測。CY5部分具有高熒光量子產(chǎn)率、良好的光穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性，在激光共聚焦顯微鏡下多輪掃描仍能保持信號強度。

同時，大黃酸部分的蒽醌共軛結(jié)構(gòu)賦予了分子良好的分子識別與自組裝能力。其羧基和羥基能夠與氫鍵供受體或金屬離子形成多點相互作用，可用于有序分子排列或納米結(jié)構(gòu)構(gòu)筑。

四、存儲與實驗注意事項

存儲條件：-20°C以下、避光、干燥、密封保存，建議充惰性氣體（氮氣或氬氣）保護(hù)。

溶解方式：用DMSO配制成儲存液（通常5-10 mM），-20°C避光保存。使用前用生理緩沖液（如PBS、HBSS或無血清培養(yǎng)基）稀釋至工作濃度（通常1-20 μM）。

工作濃度：一般為1-20 μM，需根據(jù)細(xì)胞類型預(yù)實驗優(yōu)化。濃度過高可能產(chǎn)生非特異性染色或毒性，濃度過低信號太弱。

DMSO終濃度：反應(yīng)體系中DMSO濃度不應(yīng)超過0.1%-0.2%，否則可能影響細(xì)胞活性。

染色時間：一般30-45分鐘，37°C孵育。染色后用預(yù)熱的PBS或緩沖液洗滌2-3次，去除未結(jié)合的探針，降低背景。

避免光漂白：全程避光操作，染色后盡快檢測。

緩沖液選擇：避免使用含伯胺的緩沖液（如Tris、甘氨酸），推薦使用PBS、HBSS或HEPES緩沖液（pH 7.2-7.4）。

僅供科研使用：不可用于人體或臨床診斷。

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