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37次中文名:CY5-膽汁酸,又名CY5標(biāo)記膽汁酸、Cy5-Bile acid。是由近紅外熒光染料CY5(Cyanine 5)與膽汁酸分子通過共價(jià)鍵連接而成的熒光標(biāo)記復(fù)合物。
外觀通常為藍(lán)紫色至深藍(lán)色粉末。
純度通常≥95%。
保存條件為-20°C避光密封保存,避免反復(fù)凍融。
易溶于PBS緩沖液、DMSO、DMF等,在水中也有良好溶解性。
CY5-膽汁酸由兩部分組成。CY5部分屬于花菁類近紅外熒光染料,具有共軛多甲烯鏈結(jié)構(gòu),激發(fā)波長(zhǎng)約649–650 nm,發(fā)射波長(zhǎng)約670 nm,消光系數(shù)較高(超過250,000 M?1cm?1),量子產(chǎn)率高,光穩(wěn)定性好,對(duì)pH不敏感。膽汁酸部分保留了天然膽汁酸的甾體骨架(四環(huán)稠合結(jié)構(gòu))及羥基、羧基等官能團(tuán),維持其生物活性。兩者通過酰胺鍵或酯鍵共價(jià)偶聯(lián),連接位點(diǎn)通常在膽汁酸的羧基或羥基上。近紅外發(fā)射波長(zhǎng)避開了組織自發(fā)熒光區(qū),信噪比顯著優(yōu)于FITC、TRITC等可見光染料,適合深層組織成像。
CY5-膽汁酸可標(biāo)記膽汁酸修飾的脂質(zhì)體、納米顆粒或膠束,實(shí)現(xiàn)載藥體系在體內(nèi)分布和釋放的動(dòng)態(tài)追蹤。例如CY5-脫氧膽酸整合至納米載體后,其近紅外熒光信號(hào)可實(shí)時(shí)監(jiān)控藥物在體內(nèi)的靶向遞送效率與釋放動(dòng)力學(xué)。
膽汁酸代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)研究方面,CY5-膽汁酸保留了天然膽汁酸與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NTCP、BSEP、ASBT等)的結(jié)合能力,可用于可視化膽汁酸在肝細(xì)胞中的攝取、在腸道中的重吸收以及整個(gè)腸肝循環(huán)過程。在NAFLD大鼠模型中,尾靜脈注射CY5-脫氧膽酸后,利用多光子顯微鏡可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)肝臟熒光分布,模型組肝細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度較正常組降低約45%,提示膽汁酸外排障礙是疾病進(jìn)展的重要機(jī)制。
分子互作與膜蛋白研究方面,CY5-膽酸可整合至細(xì)胞膜,用于熒光顯微鏡觀察脂筏區(qū)域及膜流動(dòng)性,也可結(jié)合FXR、TGR5等核受體和膜受體,研究膽汁酸信號(hào)調(diào)控及藥物作用機(jī)制。
流式細(xì)胞術(shù)與熒光顯微鏡檢測(cè)方面,激發(fā)波長(zhǎng)650 nm、發(fā)射670 nm的遠(yuǎn)紅熒光使其適配常見流式細(xì)胞儀和共聚焦顯微鏡的濾光片組,可進(jìn)行細(xì)胞攝取定量分析和亞細(xì)胞定位,且可與FITC、Cy3等染料實(shí)現(xiàn)多色同時(shí)檢測(cè)。
疾病診斷與藥物篩選方面,通過檢測(cè)CY5-膽汁酸的熒光信號(hào)強(qiáng)度,可評(píng)估膽汁酸代謝的異常情況,輔助診斷膽汁淤積性肝病、膽結(jié)石等疾病。
材料表面功能化方面,可偶聯(lián)至聚合物或生物材料表面,實(shí)現(xiàn)熒光標(biāo)記及傳感功能,用于界面相互作用和材料表面分布的可視化分析。
偶聯(lián)反應(yīng)通常在弱堿性條件(pH 7.5–8.5)下進(jìn)行,以碳酸氫鹽緩沖液或三乙胺提供堿性環(huán)境。常用策略是以CY5-NHS酯與膽汁酸的氨基或羥基反應(yīng),形成穩(wěn)定的酰胺鍵或酯鍵。若使用CY5-COOH,則需先通過EDC/NHS活化形成活性酯中間體。反應(yīng)溶劑可選DMSO、DMF或PBS與少量有機(jī)溶劑的混合體系。CY5-NHS酯通常以1.2–2倍過量加入,底物濃度控制在1–10 mM。室溫(20–37°C)下反應(yīng)2–12小時(shí),全程避光操作。反應(yīng)完成后通過HPLC、透析或凝膠過濾去除未偶聯(lián)的CY5和游離膽汁酸,凍干保存。
全程避光操作,防止CY5光漂白。溶解時(shí)建議使用PBS緩沖液或含適量DMSO的溶劑,水相操作可獲得均一溶液。實(shí)驗(yàn)中合理控制濃度(0.1–1 mM),避免CY5聚集導(dǎo)致熒光猝滅。儲(chǔ)存時(shí)需密封避光于-20°C,分裝保存,避免反復(fù)凍融。
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