細胞培養的微環境，尤其是培養基的組成，在細胞轉染過程中扮演著微妙而關鍵的角色。血清和抗生素這兩個常規培養的必需品，在轉染時卻可能成為“絆腳石"。了解其作用機制并采取正確策略，是優化轉染條件、避免細胞死亡的重要一環。

一、血清：轉染復合物形成的干擾者

1. 為什么血清會降低轉染效率？
大多數轉染試劑（如陽離子脂質體、陽離子聚合物）的作用原理是帶正電荷，與帶負電荷的核酸結合形成復合物，再通過細胞膜進入細胞。而血清中含有大量帶負電荷的蛋白質，它們會與轉染試劑競爭結合核酸，從而干擾甚至阻斷轉染復合物的有效形成。

2. 正確的操作策略：分步處理

第-步（無血清配制）：在配制DNA與轉染試劑的混合液時，必須使用無血清培養基（如Opti-MEM® I減血清培養基）。這是確保復合物充分、穩定形成的關鍵步驟。

第二步（復合物形成后加血清）：當轉染復合物在無血清培養基中形成后（通常孵育15-20分鐘），在將其加入細胞培養孔之前或之后，可以適量添加血清，或直接更換為含血清的完-全培養基，以維持細胞生長，降低應激反應。

二、抗生素：加重細胞應激的負擔

1. 抗生素的潛在危害
常規細胞培養中，常添加青霉素-鏈霉素（雙抗）以防止細菌污染。然而，在轉染操作前后，抗生素可能會帶來負面影響：

l 增加細胞毒性：轉染過程本身已對細胞造成壓力，抗生素的加入會進一步加重這種應激，尤其是在轉染后24小時內，細胞膜通透性增加，更易受到抗生素影響，導致細胞死亡率上升。

l 干擾轉染過程：某些抗生素（如某些陽離子性質的抗生素）可能與轉染試劑或核酸發生非特異性相互作用，影響轉染效率。

2. 最-佳實踐：轉染期間暫停使用抗生素

l 推薦方案：在準備轉染（即鋪板）時，使用不含抗生素的完-全培養基培養細胞。在配制轉染復合物、進行轉染操作以及轉染后的最初24小時內，全程避免使用抗生素。

l 后續恢復：轉染24小時后，若細胞狀態良好，可根據實驗需要更換為含抗生素的常規培養基繼續培養。

三、結語

培養條件是連接細胞與轉染試劑的橋梁。通過在復合物形成階段嚴格使用無血清培養基，以及在轉染敏感期暫停使用抗生素，可以為細胞創造一個低干擾、低應激的微環境，從而最-大化轉染效率，保障細胞活力。

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