細胞培養的成功與否，很大程度上取決于試劑與耗材的選擇是否恰當。面對琳瑯滿目的產品——DMEM、RPMI-1640、胎牛血清、胰酶、PBS、培養皿、培養瓶……新手往往感到困惑。本文將從培養基本試劑、消化與緩沖液、以及培養容器三個方面，為你系統梳理選擇指南，并澄清常見誤區。

一、培養基本試劑：培養基、血清與雙抗

1. 培養基
培養基為細胞提供必需的營養物質。常用的基礎培養基是 DMEM（高糖型），適用于大部分腫瘤細胞（如HeLa、293T、HepG2）和成纖維細胞。但也有特殊細胞需要 RPMI-1640（如懸浮淋巴細胞）或 F-12（如原代細胞）。

l 選擇原則：以細胞庫（如ATCC）說明書為準。如果沒有說明，DMEM可作為大多數貼壁細胞的起始選擇。

l 常規配方：90%基礎培養基 + 10%胎牛血清 + 1%雙抗（青霉素/鏈霉素）。

l 酚紅：多數培養基含酚紅指示劑，用于監測pH變化，但某些熒光實驗中需使用無酚紅培養基。

2. 血清（胎牛血清 FBS）
血清提供生長因子、激素和貼壁因子。

l 選擇建議：優先購買胎牛血清，批次穩定性好。進口品牌需注意正規渠道。

l 注意：血清需56℃滅活30分鐘（去除補體）？大多數常規細胞培養無需滅活，過度加熱會破壞生長因子。除非說明書特別要求。

3. 雙抗（青霉素-鏈霉素）

l 作用：防治細菌污染。

l 使用建議：新手建議加入1%雙抗。但長期培養原代細胞或進行轉染實驗時，有時使用無抗培養基以降低細胞應激。

二、消化液與緩沖液：胰酶和 PBS

1. 胰蛋白酶
貼壁細胞傳代必-備。常用濃度為 0.25% 胰酶 + EDTA。

l 作用：胰酶切割細胞間黏附蛋白和細胞與培養皿結合蛋白；EDTA螯合鈣鎂離子，輔助消化。

l 使用技巧：

1. 消化前用PBS洗滌細胞（去除血清，避免抑制胰酶）。

2. 消化時間因細胞而異：HEK293T約1分鐘，HeLa約2-3分鐘，原代成纖維細胞可能需要5分鐘以上。

3. 終止：加入等量含血清培養基即可。

l 選購：可選擇含酚紅的胰酶（便于觀察是否吸走細胞），或無酚紅版（某些檢測實驗需要）。

2. PBS（磷酸鹽緩沖液）

l 配方：無鈣鎂 PBS（關鍵區別）。含鈣鎂的PBS會促進細胞黏附，不適用于細胞洗滌。

l 用途：

1. 洗滌細胞，去除舊培養基中的血清和代謝廢物。

2. 稀釋細胞懸液。

3. 作為免疫熒光實驗中的洗滌液。

l 選購注意：商品化PBS有1×和10×濃縮液，購買時注意倍數。也可自配，但需無菌過濾。

三、培養容器：培養皿 vs 培養瓶及其他耗材

1. 培養皿

l 特點：平底、敞口、透明。

l 優點：

1. 操作方便，移液槍/細胞刮刀可任意角度進入。

2. 視野無變形，適合顯微觀察、相差拍照。

3. 適合多組平行實驗、細胞劃痕、克隆形成等。

l 缺點：敞口易污染，需小心操作；培養基蒸發較快。

l 常用規格：35 mm、60 mm、100 mm（以直徑計）。

2. 培養瓶

l 特點：立式瓶身，密封或透氣蓋。

l 優點：

1. 氣體交換可控（旋松透氣蓋即可），污染風險低。

2. 節省培養基用量（一個T25瓶底面積25 cm2，只需5-6 mL培養基）。

3. 適合長期擴增保種。

l 缺點：瓶口較小，操作稍不便；觀察時需調整角度。

l 常用規格：T25（底面積25 cm2）、T75、T175。

3. 材質與表面處理
無論培養皿還是培養瓶，主流材質均為聚苯乙烯（PS）。

l TC處理（組織培養處理）：通過等離子或化學處理使表面帶負電荷，親水，貼壁細胞才能黏附。

l 懸浮培養：使用未TC處理的低吸附皿（如細菌培養皿），或特殊超低吸附表面。

4. 其他耗材

l 移液管：1 mL、5 mL、10 mL、25 mL等，一次性無菌獨立包裝。

l 離心管：15 mL和50 mL，用于收集細胞、離心。選擇錐形底、帶刻度、無菌。

l 凍存管：1.5-2.0 mL，內旋蓋或外旋蓋，耐-196℃液氮。

四、選購避坑指南

五、總結快速選型表

掌握以上試劑耗材的選擇原則，你就能搭建一個穩定、高效的細胞培養體系，避免因選錯耗材而導致的失敗。

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