凝膠色譜凈化系統是一種基于凝膠滲透色譜技術的高效分離與純化技術,廣泛應用于環境檢測、食品安全、生命科學等領域的樣品前處理。其核心原理是通過分子尺寸差異實現分離,具有自動化程度高、污染小等優點。
1.核心機制:基于體積排阻效應,利用多孔凝膠作為固定相。當樣品通過色譜柱時,大分子因無法進入凝膠孔洞而直接通過顆粒間隙快速流出;小分子則進入孔內,路徑延長而滯留更久,從而實現按分子體積大小的分離。
2.系統組成
-色譜柱:填充有多孔凝膠顆粒,其孔徑分布決定分離范圍。例如,聚苯乙烯凝膠或多孔硅膠常用于有機物分析,而聚丙烯酰胺凝膠適用于蛋白質分離。
-流動相系統:負責將樣品傳輸至色譜柱,部分系統的流動相可以自動調節,常用溶劑如氯仿等。
-檢測器:包括紫外檢測器(波長范圍190-600nm)或熒光檢測器,實時監測洗脫液中的組分。
-數據處理系統:用于分析和展示檢測數據,如高效液相色譜系統中所使用的電腦分析軟件,可對檢測結果進行記錄、分析和處理。
3.分離流程:樣品注入色譜柱后,大分子雜質首先被洗脫并廢棄,目標小分子隨后收集,中間干擾物通過分段收集模式進一步剔除。
凝膠色譜凈化系統的測定步驟:
1.流動相準備:建議使用色譜純及以上級別的流動相(如乙酸乙酯:環己烷=1:1或二氯甲烷)。
2.樣品處理:在選擇樣品溶劑時,應盡量選擇與流動相極性相符的溶劑,推薦使用流動相作為樣品溶劑。
3.開機準備:將儀器及電腦各部分電源打開,待檢測器自檢通過后(約2分鐘),再打開工作站軟件。
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