人胚腎293細胞

Alex Van der Eb 在 1970 年代時培養出了 HEK 293 細胞系。為了產生永生化細胞系，Graham 將 5 型腺病毒的 DNA 轉染到 HEK 細胞的人類 19 號染色體中。Ad5 整合到細胞基因組中導致細胞凋亡的預防，從而導致細胞系的連續產生。在獲得成功之前，Frank Graham 進行了 293 次實驗，因此得名 HEK 293。

HEK 293細胞特點

HEK 293 細胞的直徑通常在 11-15µm 左右，一般情況下，單層貼壁培養的HEK293細胞形態扁平，直徑較大。HEK 293 細胞屬于亞3倍體人細胞系。它們攜帶 64 條染色體、三個 X 染色體拷貝以及 4 kbp Ad5 摻入 HEK 293 基因組的 19 號染色體，表明細胞遺傳學不穩定。

HEK293 細胞在基因治療領域的應用前景

一、總體結論

HEK293 是當前基因治療領域最主流、不可替代的病毒載體生產宿主平臺，短期前景廣闊；是臨床前研發、Ⅰ/Ⅱ 期臨床shou選方案；但規模化商業化階段存在成本、產能瓶頸，行業同時在并行開發新一代生產體系。

全球絕大多數 AAV、慢病毒、腺病毒、溶瘤病毒基因治療管線，早期均采用 HEK293 平臺。

二、在基因治療中的核心應用（載體生產）

1. rAAV（腺相關病毒，體內基因治療頭號載體）

原始 HEK293 自帶Ad5 E1A/E1B，wan美支撐三質粒瞬轉系統生產 rAAV。

適用：遺傳性眼病、血友病、神經退行性疾病、肌肉疾病體內基因藥物；

優勢：HEK293 來源的 AAV體內轉導活性更高、衣殼翻譯后修飾更接近人源；對比昆蟲 Sf9 桿狀病毒系統，病毒體內藥效更穩定；

現狀：目前多款 FDA、NMPA 進入臨床的 AAV 管線均采用懸浮 HEK293 瞬轉工藝。

2. 慢病毒 Lentivirus（優先 HEK293T/293FT）

用于CAR-T、CAR-M、體外基因修飾干細胞。

體外改造免疫細胞、造血干細胞、iPSC，是細胞治療配套核心載體。

3. 重組腺病毒 & 溶瘤腺病毒

復制缺陷腺病毒缺失 E1 區，只能在 HEK293 中擴增；廣泛用于溶瘤病毒、腫瘤基因治療、腺病毒載體疫苗。

4. 其他延伸方向

1）病毒樣顆粒 VLP（基因遞送納米載體、疫苗研發）；

2）外泌體遞送系統：HEK293 來源工程化外泌體作為非病毒遞送載體；

3）體外藥效模型：評價載體靶向、基因表達、藥物毒性。

三、HEK293 平臺核心優勢（支撐廣闊前景）

天然基因型優勢

HEK293 穩定整合腺病毒 E1 基因，無需額外提供，是 AAV、腺病毒生產的天然宿主，其他細胞系無法替代。

轉染效率ji高，工藝靈活、開發快

瞬時轉染體系，更換目的基因、AAV 血清型僅需要更換質粒；研發周期短（幾周即可生產病毒），極適合早期管線快速迭代。

 Preclinical、I/II 期臨床l首要選擇。

人源細胞，產物質量優勢

人源細胞完成蛋白糖基化、折疊；病毒衣殼修飾更接近天然狀態，體內生物活性優于昆蟲細胞產物，更容易通過藥理毒理比對。

可懸浮馴化，支持放大

293F、Expi293F 無血清懸浮株成熟，可在一次性生物反應器放大至 50–200 L，適配 GMP 生產；國內外 CDMO 平臺工藝非常成熟。

監管認可度充分

數十年使用歷史，大量臨床數據積累；法規機構對 HEK293 生產載體的質控策略、雜質（HCP、hcDNA）評估體系成熟。

腫瘤溶瘤病毒；

CAR-T 通用型慢病毒載體；

基因編輯（CRISPR）遞送載體生產。

趨勢 4：多條技術路線并行競爭，但不會wan全替代 HEK293

Sf9 昆蟲細胞系統產能更高、成本更低，適合大批量；但產物體內活性存在爭議。

中長期格局：多條路線共存。