培養基促生長實驗操作

         1  目的 

         制訂培養基靈敏度實驗操作，是為了規范、統一培養基靈敏度檢測，確保微生物檢測準確、安全進行。 

         2  范圍 

         適用于所有配制好并滅菌的培養基。

         3  編寫依據 

         EP6.5

         4  術語 

         無 

         5  職責 

         QC衛檢組人員負責培養基的配制、滅菌、靈敏度實驗。 

         6  內容 

         6.1  使用的設備、器具 

         生物安全柜、無菌培養皿、無菌刻度吸管或無菌注射器、無菌玻璃涂布器、酒精燈等 

         6.2  使用的菌株 

   EP檢測用ATCC的菌株:

    金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus        ATCC 6538

    大腸埃希菌Escherichia coli                 ATCC 8739

    銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa     ATCC 9027       

    枯草芽孢桿菌 Bacilllus subtilis         ATCC 6633

    沙門氏菌Salmonella enterica subsp      ATCC 14028

    白色念珠菌Candida albicans             ATCC 10231

    黑曲霉Aspergillus niger                     ATCC 16404

         培養基靈敏度檢測所用的菌株傳代次數不得超過5代, 并采用適宜的菌種保藏技術，以保證試驗用菌株的生物學特性。

         6.3  檢測頻率 

         每批配制、滅菌后的培養基均應做靈敏度測試。 

         6.4  操作方法

         6.4.1  對照標準培養基

         用已經過實驗證明合格的培養基或購買的有質量證書的成品平皿培養基作為對照標準培養基.

         6.4.2  實驗培養基

         將瓊脂類的實驗培養基在鼓風干燥箱內加熱融化后，冷卻至45℃左右，以無菌的方式在無菌培養皿中注入15～20ml，備用。液體類的培養基直接使用。

         6.4.3  菌懸液的制備

         6.4.3.1  細菌菌懸液的制備

         方法一：取細菌的斜面培養物1耳匙接種在酪蛋白大豆消化肉湯培養基中30～35℃電熱恒溫培養箱培養18～24h，取上述培養物用無菌水按10倍系列稀釋，分別制成10-7～10-8的菌懸液備用。 

         6.4.3.2  霉菌菌懸液的制備

         取白色念珠菌的斜面培養物1耳匙接種在沙氏瓊脂斜面上于20～25℃培養24～48h，加入無菌水4ml制成原液，取上述原液按10倍系列稀釋，分別制成10-6～10-7的菌懸液備用。 

         取黑曲霉的斜面培養物加入無菌水4ml制成孢子懸液，取上述孢子懸液按10倍系列稀釋，分別制成10-6～10-7的菌懸液備用。 

         方法二：直接用杭州微球生物技術有限公司的產品-培養基靈敏度指示劑，該產品已經幫我們控制了細菌數量，只要直接拿稀釋液稀釋下就可以直接取到10～100CFU試驗菌。使用方便，數量。推薦用此方法操作。

         6.4.4 培養基的生長促進實驗 

         6.4.4.1  瓊脂類培養基的生長促進實驗   

         每株菌用2個實驗培養基平皿，用表面涂布法在每個平皿表面接種0.1～0.5ml的菌懸液（約10～100CFU試驗菌），同時用2個對照標準的培養基平皿做對照，接種相同量的菌懸液試驗，在規定溫度下培養,取出平皿點計菌落數。實驗培養基上的微生物數量應為對照培養基上微生物生長數量的70%-150%范圍內。

         6.4.4.2  液體類培養基的生長促進實驗 

         每株菌用2管（或瓶）實驗培養基，接種0.1～0.5ml的菌懸液（約10～100CFU試驗菌），同時用2個對照標準的培養基或用已知合格的酪蛋白大豆消化瓊脂平皿做對照，接種相同量的菌懸液試驗，在規定溫度下培養,對比或計數，在規定時間內能生長菌落為合格。 

         6.4.5  培養基的生長促進和抑制特性試驗 

         6.4.5.1  液體培養基的生長促進特性試驗 

         接種0.1～0.5ml的菌懸液（約10～100CFU試驗菌）于一定量適合的培養基。在特定溫度下培養，培養時間不超過試驗中規定的MAX短期限。與對照標準的培養基獲得的微生物生長相比，接種微生物的生長應明顯。

         6.4.5.2  固體培養基的生長促進特性試驗 

         采用表面涂布法，在每一塊平皿上接種0.1～0.5ml的菌懸液（約10～100CFU試驗菌）適宜微生物。在特定溫度下培養，培養時間不長于試驗中規定的MAX短期限。接種微生物的生長與對照標準的培養基獲得的微生物生長相當。 

         6.4.5.3  液體或固體培養基的抑制特性試驗 

         用適當培養基接種至少100 CFU適宜微生物。在特定溫度下培養，培養時間至少為試驗中規定的MAX長期限。無受試微生物生長。