來自羅氏的 Gregor Jordan 等人基于 Gyrolab 平臺開發了一種全血清中檢測游離抗原的免疫分析方法,該方法旨在解決以下游離物分析中的挑戰:
樣本的稀釋導致抗原-抗體復合物解離,高估游離抗原濃度
抗體-抗原復合物半衰期短(<100秒),傳統LBA方法無法準確捕捉
存在治療性抗體時,難以區分游離與結合狀態的抗原

該方法采用橋接免疫分析原理,具體步驟如下:
1
將標記后的捕獲抗體包被在鏈霉親和素的親和柱上
2
加入未稀釋血清樣本,使游離抗原與捕獲抗體結合
3
加入標記的檢測抗體與抗原的另一表位結合
4
檢測信號,定量游離抗原

方法關鍵要求
捕獲抗體與檢測抗體識別的抗原表位不重疊
捕獲抗體與治療性抗體競爭結合抗原的相同表位
孵育時間極短(優選<2秒)
無需樣本稀釋,避免復合物解離


研究目的
評估抗體藥物對 CCL2 的“清除效率",即抗體是否有效結合并清除游離 CCL2。
研究方法
平臺與方法

實驗設計
校準曲線與質控

校準范圍:2430 pg/mL → 10 pg/mL
QC 樣本:
High QC:1820 pg/mL
Mid QC:230 pg/mL
Low QC:30 pg/mL
接受標準:
±20% 偏差,CV < 15%
藥物干預組

CNTO0888:單特異性抗 CCL2 抗體(對照)
CKLO2-SG1095:雙特異性抗 CCL2 抗體(實驗組)
濃度設置:
低劑量:7.5 ng/mL 或 15 ng/mL
高劑量:10 μg/mL
結果與討論

CNTO0888 在高濃度下幾乎全清除游離 CCL2
CKLO2-SG1095 的清除效率略低,但仍顯著優于空白組
低劑量下雙抗仍有中等清除能力,提示其劑量依賴性

研究目的
在不稀釋的血清樣本中,快速、精準地測定游離補體 C5 的濃度,用于評估抗 C5 抗體藥物(如 eculizumab、crovalimab)的體內藥效。
研究方法
平臺與方法

實驗結果
標準曲線線性范圍: 0.55 – 3000ng/ml
LOQ:0.5 ng/mL,足以檢測 < 0.1 % 的游離 C5(人總 C5 ≈ 400 nM)


總 結
方法技術優勢

Gyrolab 平臺有的免孵育流穿模式,大程度降低基質中的非特異性結合,有效降低基質干擾,在游離物分析中可以支持全血清檢測,并且減少因孵育造成的抗體-抗原復合物的解離,使游離物的分析更加準確高效。
參考文獻:
[1] Method for determining the free antigen of an antibody in a sample, Gregor Jordan, Martin Schaefer, Maria Viert; Pub No. US2023/0393125 A1。
立即詢價
您提交后,專屬客服將第一時間為您服務