重組蛋白是什么？ 

重組蛋白是一種人工制造的蛋白，它是利用被改造成攜帶目的基因的宿主細胞產生的。重組蛋白與相應天然存在的（野生型）蛋白具有相同的氨基酸序列，或者對其序列進行修飾以改善性質，如溶解度或產量。 

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重組蛋白應用 

重組蛋白被廣泛應用與生物醫學研究、診斷和治療領域中，并已成為各個科研領域的重要工具。其在實驗室中的用途包括： 

· 細胞培養添加劑，包括用于原代細胞擴增、分化或干細胞重編程的生長因子 

· 用于疾病模型建模和藥物發現的類器官和其他?3D 細胞培養 

· ?通過用重組細胞因子刺激CAR-T 細胞的擴增 

· 探測細胞功能和細胞信號通路的研究工具 

· 用于免疫和產生抗體的抗原 

· 基于細胞的功能性分析的組成部分，如?細胞遷移和血管生成 

具有生物活性的重組蛋白 

上述應用要求重組蛋白具有生物活性；也就是說，蛋白被細胞識別并在這些細胞中引起變化。生物活性可以在適當的基于細胞的試驗中測量，并量化為比活性或 EC₅₀。 

無生物活性的重組蛋白可用作蛋白分析研究的標準，包括免疫測定，如免疫印跡、ELISA、凝膠移位和免疫組織化學。 

重組蛋白的類型 

許多在生物學上重要的重組蛋白都可從市場上購得，因此無需表達、純化和驗證常用的生物活性重組蛋白。 

重組蛋白的主要類型包括： 

· 生長因子：細胞產生并用于通訊的一組細胞間信號蛋白。它們刺激各種細胞過程，包括細胞分裂、分化、遷移和存活。突出的生長因子家族包括：? 

o FGF：成纖維細胞生長因子 

o VEGF：血管內皮生長因子 

o 神經營養因子：主要作用于大腦和神經系統相關細胞的一類生長因子 

· 細胞因子：包括對免疫細胞功能和通訊至關重要的干擾素、白細胞介素、促炎細胞因子和趨化因子 

· 酶：能進行化學轉化的生物活性蛋白；包括重組蛋白酶、激酶和核酸酶 

重組蛋白生產類別 

當為特定應用選擇重組蛋白時，了解需要哪種等級的質量控制和文件是有幫助的。 

僅供研究使用 (RUO) 

研究級重組蛋白適用于多種生命科學研究應用，包括細胞模型開發、維持細胞表型和體外分析。 

無動物成分 

作為防止動物病原體污染的額外保護措施，無動物來源成分重組蛋白是使用非動物來源的原料制成的。 

GMP 重組蛋白 

遵循GMP準則生產的重組蛋白經過了廣泛的測試，并附有文件，以支持更高要求的項目/應用。 

無論開展基礎研究還是開發新一代工程化細胞療法，您都需要能夠依賴實驗中使用的重組蛋白的質量及完整性。作為主要重組蛋白供應商和制造商，賽默飛世爾科技提供大量高質量的 Invitrogen 和 Gibco 品牌蛋白（包括 Gibco?PeproTech?蛋白），以滿足這些需求。 

重組蛋白常見問題 

如何測定重組蛋白的生物活性？ 

生物測定旨在測量給定生長因子或細胞因子的生物活性。在大多數情況下，生物測定是基于細胞的檢測，會使用不同的指示細胞，例如原代細胞或細胞系。常用的生物測定包括細胞增殖檢測、趨化作用檢測、細胞因子生成檢測和細胞毒性檢測。給定細胞因子的生物活性以 ED₅₀?表達，它代表誘導 50% 最大反應的細胞因子濃度。 

以 ED₅₀ 表示的比活度與以單位/mg 表示的比活度之間有何關系？ 

生物活性蛋白質的比活度可通過以下公式確定： 
1 x 10?^6?/ ED?_50?(ng/mL) = 比活性 (units/mg) 

ED?_50?(又稱EC?_50?) 可在重組蛋白的CoA上找到，但我們建議在功能檢測系統中確定特定重組蛋白的ED?₅₀ 

應如何復溶重組蛋白？ 

首先，對容器進行離心，使粉末聚集在管的底部。我們通常建議將其復溶至 0.1 至 1.0 mg/mL 濃度。大多數蛋白可通過加入無菌蒸餾水復溶。但產品數據表或 CoA 將說明何時需要使用水以外的稀釋液。也可在這些文檔中找到推薦的溶液、載體蛋白濃度和擴展的儲存條件。 

應如何儲存重組蛋白？ 

通常，我們建議將凍干重組蛋白儲存在 –20°C 下，但可在 4°C 或室溫下短期儲存。復溶蛋白溶液時，我們建議您制備至少含 10 μL 蛋白溶液的工作等份試液，并在 –20°C 至 –80°C 下儲存。不允許進行多次反復凍融。有關儲存凍干和復溶重組蛋白的產品特定說明，請見產品手冊、數據表或檢驗證書 (CoA)。 

為什么我無法在凍干重組蛋白瓶中看到蛋白沉淀？ 

重組蛋白通常不含載體蛋白或添加劑（如 BSA、HSA、蔗糖等）。因此在凍干過程中，蛋白成品可能為薄薄的，有時肉眼不可見的薄膜形式沉積在小瓶上，而非顆粒狀。沉淀物的大?。ㄈ绻校┡c樣品瓶中的重組蛋白數量沒有直接關系。 

為確保蛋白產物的回收，在打開凍干重組蛋白瓶之前，建議對其進行離心 20–30 秒，以將可能殘留在瓶蓋或側面的任何蛋白聚集到瓶底。復溶后，您可以通過在 SDS-PAGE 上運行少量產品來確認是否存在產品蛋白。通常來說，只要在丙烯酰胺凝膠上上樣 10 ng 的蛋白，應該就能看到預期大小的蛋白條帶。 

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