永生化細胞不是“放培養箱就不用管"的消耗品。SV40 大 T 抗原給了小膠質細胞超長待機，也帶來代謝壓力、基因組漂移、支原體易感三重隱患。下面把實驗室里真正奏效的預防、診斷、修復動作寫成可執行的周歷，每步都附帶判定標準，讓細胞在 50 代之后依舊保持原代特征。

每日巡檢：顯微鏡下的 30 秒判讀

形態紅線

原代小膠質細胞呈“阿米巴"或“分枝狀"；永生化株若出現大量圓形、無突觸細胞，預示激活過度或基因組漂移。每天同一時間段用 20× 物鏡隨機拍 3 個視野，計算分枝細胞比例 < 60 % 即觸發排查。

培養基顏色

pH 指示劑酚紅在 24 h 內由紅轉橙黃，提示乳酸堆積。立即換液并檢測 CO? 濃度，確保 5 % ± 0.2 %。

每周體檢：三指標鎖定早期異常

月度深度維護：基因組穩定性掃描

STR 指紋

每 5 代做一次 16 位點 STR，與 ATCC 原始數據比對 ≥ 90 %。出現位點漂移先復核試劑，確認后冷凍備份株啟用。

端粒長度

qPCR T/S 比值下降 15 % 以上提示 hTERT 活性衰減，需重新轉導 SV40 或更換主代株。

半年級大保養：培養體系整體翻新

培養箱高溫滅菌

56 °C 干熱 2 h + 紫外線 30 min，清除箱壁生物膜。完成后用無菌棉簽蘸 TSB 培養基擦拭，48 h 無渾濁才算過關。

液氮罐細胞盤點

建立 Excel + 條碼雙系統，每管掃碼核對位置、代次、日期。發現標簽模糊立即重貼并同步云端備份，防止找不到種子株。

應急維修：污染突襲 48 h 內復活實驗

支原體陽性

• 第 0 h：整批細胞高壓滅菌

• 第 6 h：培養箱、超凈臺、移液器全面 2 % Virkon 擦拭

• 第 24 h：重新復蘇備份株，復蘇存活率 < 85 % 直接退貨供應商

真菌污染

真菌孢子易在加濕盤滋生。污染發生時，連同加濕盤一起更換，改用無菌去離子水 + 0.2 µm 過濾，每日更換。

耗材與試劑輪換表

記錄模板：讓維修動作可追溯

建立 Notion 頁面，每頁對應一株細胞，字段包括：

• 當日形態照片

• 支原體 Ct 值

• 換液時間戳

• 試劑批次號

• 異常描述與處理人

所有異常記錄自動同步到 Slack 頻道，實驗團隊即時可見。