一、什么是 GSH?

??GSH(Glutathione，谷胱甘肽)?? 是一種由 ??谷氨酸(Glutamate)、半胱氨酸(Cysteine)和甘氨酸(Glycine)?? 組成的三肽，是生物體內最重要的??非酶抗氧化劑??之一，廣泛存在于幾乎所有細胞中，尤其在肝臟、腎臟等代謝活躍的組織中含量豐富。

GSH 的主要功能包括：

1.??抗氧化作用：??

•直接清除自由基(如活性氧 ROS、活性氮 RNS);

•維持細胞內氧化還原平衡，保護細胞免受氧化損傷;

•作為其他抗氧化劑(如維生素 C、E)再生的輔助因子。

2.??解毒作用：??

•與藥物、重金屬、環境毒素等結合，形成可排泄的復合物，發揮解毒功能;

•依賴 GSH 的解毒酶(如谷胱甘肽過氧化物酶 GPx、谷胱甘肽-S-轉移酶 GST)在排毒中起關鍵作用。

3.??調節細胞信號與增殖：??

•參與調控細胞氧化還原敏感的信號通路，影響細胞生長、凋亡與免疫。

二、為什么要檢測 GSH?

在科研和臨床中，檢測 GSH 水平具有重要意義：

? ??在基礎科研中：??

•研究??氧化應激(Oxidative Stress)??與疾病(如癌癥、神經退行性疾病、心血管疾病、糖尿病等)的關系;

•探討??抗氧化防御系統??的功能狀態;

•評估藥物、毒物、輻射、環境因素對細胞或組織氧化還原狀態的影響;

•研究細胞代謝、線粒體功能、炎癥反應等過程中的 GSH 動態變化。

? ??在藥物研發與毒性評價中：??

•評價候選藥物的??抗氧化 / 促氧化作用??;

•觀察化學物質或藥物對細胞或組織的??毒性(尤其是肝毒性、氧化損傷)??;

•用于??保健品、營養補充劑、功能性食品??的功效評估。

? ??在臨床與醫學檢驗中：??

•輔助診斷某些??代謝性疾病、肝病、神經疾病、免疫疾病??;

•評估機體的??抗氧化能力與氧化應激水平??。

三、GSH 的存在形式

在細胞內，GSH 主要以兩種形式存在：

1.??還原型谷胱甘肽(GSH)：??

•具有抗氧化活性，是細胞中最主要的形式;

•通過提供還原力清除自由基，自身被氧化為 GSSG。

2.??氧化型谷胱甘肽(GSSG，Glutathione Disulfide)：??

•是 GSH 被氧化后的產物，抗氧化能力大幅下降;

•細胞中 GSSG 比例升高是氧化應激的重要標志。

?? ??科研中常檢測：??

•??總谷胱甘肽(Total GSH = GSH + GSSG)??

•??還原型 GSH??

•??GSH/GSSG 比值(衡量細胞氧化還原狀態的關鍵指標)??

四、GSH檢測試劑盒的常見檢測原理

目前市面上常見的 ??GSH檢測試劑盒?? 主要基于以下幾種方法：

??1. DTNB(Ellman 試劑)法 / 5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸) 法??

?? 原理：

•??DTNB(5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid))?? 可與 GSH 中的巰基(-SH)反應，生成 ??黃色的 2-硝基-5-硫代苯甲酸(TNB)??，在 412 nm 處有強吸收峰;

•通過測定吸光度變化，定量 GSH 含量;

•若樣品中存在 GSSG，通常需先用 ??還原劑(如 NADPH + GR，谷胱甘肽還原酶)?? 將其轉化為 GSH 后再檢測(即檢測 Total GSH)。

? 優點：

•操作相對簡單，靈敏度高;

•適用于細胞裂解液、組織勻漿、血液等生物樣本;

•是目前經典的 GSH 定量方法之一。

? 局限：

•易受其他含巰基物質(如半胱氨酸、蛋白質中的 SH 基團)干擾;

•需注意樣本處理(如去蛋白)以減少干擾。

?? ??常見試劑盒名稱：??

•GSH/GSSG 檢測試劑盒(DTNB 法)

•Total Glutathione Assay Kit

•Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit

??2. 熒光探針法(如利用 GSH 特異性熒光染料)??

?? 原理：

•使用 ??GSH 特異性的熒光探針??(如 ThiolTracker™ Violet、Monobromobimane [mBrB] 等)，與 GSH 反應生成熒光產物;

•通過熒光強度定量 GSH 含量，可用熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。

? 優點：

•靈敏度高，適合低豐度樣本;

•可進行細胞內實時檢測(如活細胞熒光成像)。

? 局限：

•熒光探針可能與其他巰基化合物交叉反應;

•需要特定儀器(熒光或流式)。

??3. 酶循環放大法(Enzymatic Recycling Assay)??

?? 原理：

•利用 ??谷胱甘肽還原酶(GR)和谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)?? 等酶類，通過循環反應放大信號;

•與 DTNB 聯用，提高檢測靈敏度和特異性;

•是許多商品化試劑盒采用的優化方法。

? 優點：

•靈敏度更高，檢測限更低;

•適合微量樣本(如少量細胞或組織)。

??4. 比色法 / 微量法(適用于 96 孔板高通量檢測)??

•很多商品化試劑盒將上述原理(如 DTNB 法)優化為可在 ??96 孔板?? 上進行的比色檢測，便于高通量篩選和自動化儀器讀取。

五、GSH檢測試劑盒的常見類型總結

六、如何選擇合適的 GSH檢測試劑盒?

選擇 GSH檢測試劑盒時，建議考慮以下因素：

1. ??檢測目標：??

•只檢測 ??GSH???還是需要同時檢測 ??GSSG?? 和計算 ??GSH/GSSG 比值???

•是否關注 ??總谷胱甘肽(GSH + GSSG)???

2. ??樣本類型：??

•細胞裂解液、組織勻漿、血液/血清、尿液、培養基上清?

•是否為 ??活細胞檢測??(如熒光探針法)?

3. ??檢測平臺：??

•是否使用 ??酶標儀(比色法)???

•是否需要 ??熒光檢測(如熒光酶標儀)?? 或 ??流式細胞儀???

•是否需要適配 ??96 孔板高通量檢測???

4. ??靈敏度與樣本量：??

•樣本量少(如少量細胞)時，選擇 ??高靈敏度酶循環法??;

•樣本量充足時可選擇常規 DTNB 法。

5. ??是否需要去除干擾：??

•蛋白質或其他含巰基物質可能干擾，有些試劑盒提供 ??去蛋白步驟?? 或 ??專用緩沖液??。

七、使用 GSH檢測試劑盒的注意事項

1.??樣本處理：??

•細胞樣本：收集后迅速冷凍或立即裂解，避免 GSH 氧化為 GSSG;

•血清/血漿：避免溶血，因血紅蛋白中的巰基會干擾檢測;

•建議設置空白對照、標準曲線和陽性/陰性對照。

2.??避免氧化：??

•GSH 易被空氣氧化為 GSSG，操作時盡量避光、低溫，操作迅速;

•推薦使用 ??抗氧化劑處理?? 或 ??快速檢測流程??。

3.??標準曲線：??

•大多數試劑盒提供 GSH 標準品，需建立標準曲線進行定量分析。

4.??試劑保存：??

•DTNB、NADPH 等試劑通常對光敏感，需避光低溫保存;

•酶類(如 GR)需在 -20℃ 保存，避免反復凍融。

八、總結

??GSH??是重要的內源性抗氧化劑，維持細胞氧化還原平衡。

??檢測意義：??氧化應激、疾病機制、藥物毒性、代謝研究等方向的關鍵指標

??存在形式??：還原型 GSH(活性)、氧化型 GSSG;常檢測 GSH、總 GSH、GSH/GSSG 比值

??主流方法：??DTNB 法(比色)、酶循環法、熒光探針法、比色高通量法

??試劑盒選擇??：根據樣本類型、檢測目標(GSH / GSSG / 比值)、平臺(酶標儀/熒光等)選擇

??關鍵點：??避免氧化、控制樣本處理時間、設立對照、使用標準曲線

如你正在開展與??氧化應激、細胞代謝、藥物毒性、抗氧化研究??相關的實驗，檢測 GSH 水平將是非常關鍵的一步。