Kd≈10?1? M,接近共價鍵。BMR2030把重組鏈霉親和素以酰胺鍵固定在6%交聯瓊脂糖,表面密度≥6 mg蛋白/mL凝膠,實測動態載量≥9 mg biotinylated IgG/mL,允許在150 cm/h流速下保持<0.3 MPa背壓。
45–165 μm粒徑分布,HETP值0.08 cm,適合0.5×5 cm到1×30 cm柱床;柱高10 cm時理論塔板數>3000,滿足高純度捕獲,也能直接裝進96孔過濾板做高通量篩選。
pH 2–13內4 h載量損失<5%;6 M鹽酸胍、8 M尿素、20 mM β-ME、70%乙醇均可短期接觸。0.1% SDS會使鏈霉親和素亞基解聚,載量驟降60%,清洗時禁用。
4 ℃結合速率常數k?降低25%,延長孵育到30 min可彌補;25 ℃載量峰值出現更早,適合快速批次純化。樹脂在60 ℃處理1 h活性剩85%,可承受熱滅菌,但建議≤40 ℃長期使用。
標準流程:0.1 M NaOH 15 min → 中性PBS → 20%乙醇保存。循環100次載量剩80%,200次剩65%;若改用0.1 M檸檬酸鈉pH 2.2洗脫,壽命縮短至50次,但能在溫和條件下回收活性蛋白。
每批BMR2030出廠附三份數據:
鏈霉親和素載量(HABA法)
游離生物素結合率(≥95%)
顆粒完整率(激光粒度,>95%)
任一項超±5%即判定不合格,可無條件退換。
融合標簽:Biotin-Tag、Avi-Tag、酶標生物素均適用
緩沖液:Tris、PBS、HEPES,鹽濃度0–2 M,還原劑≤20 mM DTT
金屬螯合劑:≤10 mM EDTA無影響,>50 mM會削弱電荷屏蔽,導致非特異上升
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