酶學特性簡述

Catalase, CAT是血紅素四聚體酶，催化H?O?分解為H?O和O?，周轉數較高。該酶對氧化應激響應敏感，活性變化反映細胞抗氧化能力狀態。

檢測方法選擇

紫外動力學法

監測240 nm處H?O?吸光度下降，直接反映酶活性。需紫外分光光度計和動力學讀取功能，適合大多數實驗室。關鍵參數：H?O?濃度10-20 mM，反應溫度25-37℃，記錄初始30秒斜率。

鉬酸銨顯色法

H?O?與鉬酸銨生成黃色絡合物（405 nm），適合無紫外設備場景。靈敏度較低（檢測限~1 U/mL），需嚴格計時（反應5分鐘），避免H?O?自發分解干擾。

樣本制備要點

組織勻漿用Tris-HCl緩沖液（50 mM, pH 7.4），添加PMSF（1 mM）抑制蛋白酶。避免磷酸鹽緩沖液（干擾顯色法）和反復凍融（血紅素脫落）。血清樣本防溶血，紅細胞CAT濃度較高。

細胞裂解推薦溫和 detergent（0.1% Triton X-100），禁用超聲（產生自由基抑制酶活）。裂解液立即測定或-80℃保存。

關鍵干擾因素

假陽性

樣本含過氧化物酶（POD）時競爭性消耗H?O?。添加3-氨基-1,2,4-三唑（3-AT, 10 mM）選擇性抑制CAT，差值法區分CAT與POD貢獻。

假陰性

重金屬離子（Pb2?、Cd2?）螯合活性中心巰基，添加EDTA（1 mM）可緩解。高濃度抗壞血酸（>1 mM）直接還原H?O?，需稀釋或添加抗壞血酸氧化酶預處理。

高鹽（>0.5 M）導致酶構象變化，適當稀釋樣本。高脂樣本濁度干擾紫外法，需離心去除或改用顯色法。

操作優化建議

底物濃度控制在10-30 mM，過低偏離零級動力學，過高引發底物抑制。溫度波動1℃導致活性偏差3%-5%，酶液需預平衡至反應溫度。

數據記錄取初始線性期（10-60秒），避免終點法。活性單位：每分鐘分解1 μmol H?O?為1單位。

試劑盒選購提示

確認方法學（紫外法/顯色法）與設備匹配。核查底物穩定性（預分裝H?O?優于自行配制）。植物樣本需確認是否含PVP去除多酚干擾。