檢測波長與顯色原理

AOPP是蛋白質在氧化應激下形成的含雙酪氨酸的交聯產物。比色法檢測波長340nm。原理：AOPP在酸性條件下與碘化鉀反應，生成的三碘化物離子在340nm有特征吸收。氯胺-T作為標準品，因氯胺-T在340nm的摩爾消光系數與AOPP相近。反應體系：200μL樣本加入1mL 20mM磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）和200μL 1.16M KI，渦旋混勻后立即測340nm。

線性范圍與靈敏度

AOPP檢測的典型線性范圍：20-200 μmol/L氯胺-T當量。最較低檢測限為5 μmol/L。健康人血清參考區間：50-110 μmol/L；慢性腎病患者：150-300 μmol/L；透析患者可高達400 μmol/L。超出線性范圍的高值樣本需用PBS稀釋后重測，稀釋倍數不超過10倍（過高稀釋會導致誤差放大）。低值樣本（<20 μmol/L）可通過增加樣本體積至400μL，相應減少緩沖液體積來提高檢測靈敏度。

干擾物質及其容許濃度

游離酪氨酸濃度高于100μM會干擾，因酪氨酸在340nm有微弱吸收。膽紅素高于50μM時需設置樣本空白（不加KI），并在計算時扣除。甘油三酯高于2mM導致濁度增加，可通過樣本4℃ 12000g離心15分鐘去除乳糜。血紅蛋白高于0.5g/L時需用氯仿提取后再測定。最嚴重的干擾來自樣本中的次氯酸（HOCl），其氧化活性會持續產生新的AOPP，檢測前加入10mM甲硫氨酸淬滅。

消光系數與校準曲線

氯胺-T標準品（Sigma 857319）溶于PBS，濃度0-200μM。氯胺-T在340nm的消光系數為20,000 M?1·cm?1。每個實驗室應自行測定此值，因不同批次氯胺-T的純度差異。校準曲線需包含至少6個濃度點，每點重復3次。曲線通過強制過零點（扣除試劑空白）或非強制零點均可，但非強制零點時截距不應超過10%的標準品較低點響應值。曲線相關系數要求R2 ≥ 0.99。

試劑穩定性參數

碘化鉀溶液（1.16M）需避光保存，光照下I?被氧化為I?使空白升高。KI溶液在4℃避光可穩定2周，出現黃色即棄用。磷酸鹽緩沖液（20mM，pH 7.4）可室溫存放1個月。氯胺-T標準儲備液（10mM）需用PBS新鮮配制，4℃避光可使用5天，-20℃分裝可保存1個月，但凍融會降解。樣本檢測應在取樣后4小時內完成，長期保存的樣本（-80℃）測得的AOPP值比新鮮樣本低10-15%。