樣本預處理：決定提取效率的第一步

培養細胞需先去除培養基，用預冷的PBS漂洗兩遍。貼壁細胞可用細胞刮刀收集，避免胰酶消化過度損傷蛋白。組織樣本需剪切成小塊，液氮研磨或勻漿器破碎，整個過程保持低溫。

裂解液與蛋白酶抑制劑的配合

KTP3003試劑盒提供的裂解液含有溫和的非離子去污劑，能選擇性破壞胞漿膜而不溶解膜蛋白。每1mL裂解液需添加10μL蛋白酶抑制劑混合物，在冰上預混后使用。抑制劑失效是提取失敗的主要原因，分裝儲存的抑制劑需避免反復凍融。

裂解操作的關鍵參數

加入裂解液后，用移液器反復吹打10-15次，冰上孵育20分鐘。每5分鐘渦旋震蕩一次，每次5秒。過度震蕩會導致核膜破裂，混入核蛋白；震蕩不足則胞漿蛋白釋放不-徹-底-。孵育時間不宜超過30分鐘，否則去污劑可能開始溶解膜蛋白。

離心分離的轉速與時間

4℃下以12,000×g離心15分鐘。上清液即為胞漿蛋白組分。注意不可使用更高轉速，否則微小細胞碎片會沉淀不-完-全-，污染上清。取上清時避免觸及沉淀，建議保留約50μL液體在離心管中。

蛋白定量前的脫鹽處理

提取的胞漿蛋白含有去污劑和高濃度鹽，會干擾BCA法檢測。推薦使用脫鹽柱或透析方式處理小體積樣本。若直接定量，需設置裂解液空白對照，并將標準品稀釋于相同裂解液中。

分裝與凍存規范

單次實驗用量分裝成小管，每管50-100μL。-80℃凍存可保存6個月。避免反復凍融，每次解凍后蛋白活性下降約15%-20%。使用前冰上解凍，不可加熱或渦旋。