試劑盒的組成與儲存條件

CheKine™ Pro-過-氧-化-氫-酶（CAT）活性檢測試劑盒（熒光法）包含以下核心組分：Assay Buffer（即用型，4℃保存）、ReagentⅠ（即用型，-20℃避光分裝保存）、ReagentⅡ（即用型，-20℃避光保存）、H?O? ReagentⅢ（需臨用前稀釋）以及Standard（1M，-20℃避光分裝保存）。ReagentⅠ具有毒性，ReagentⅢ具有腐蝕性，操作時需在通風櫥中進行。試劑盒可檢測動物或植物組織、細胞、血清（漿）及其他液體樣本。

工作試劑配制與標準曲線設置

Working Reagent需臨用前避光配制：取50μL ReagentⅠ和20μL ReagentⅡ加入4.93mL Assay Buffer中充分混勻。該體積可供100次檢測使用，按需配制，當天使用完畢。H?O? ReagentⅢ的稀釋分兩步完成：先取5μL ReagentⅢ加入4.995mL去離子水，再取15μL稀釋液加入4.395mL Assay Buffer。標準品需將1M Standard用去離子水稀釋10000倍得到0.1mM標準品，再按下表梯度稀釋至50、40、20、10、5、2.5、1.25μM。標準曲線每個濃度點建議設置復孔，空白孔以去離子水替代標準品。

樣本制備的差異化方案

不同樣本類型的制備方法存在差異。動植物組織：稱取0.1g樣本加入1mL預冷Assay Buffer，冰浴勻漿后10,000g、4℃離心10min取上清。細胞或細菌：收集500萬個細胞，用冷PBS清洗后加入1mL預冷Assay Buffer，冰浴超聲破碎（功率20%或200W，超聲3s間隔7s，重復30次），離心取上清。血清或其他液體樣本：直接離心取上清即可。所有樣本以新鮮制備為宜，若不能立即檢測應儲存于-80℃。

預實驗稀釋倍數的確定策略

試劑盒的線性檢測范圍為0.01-10 U/mL。不同樣本的CAT活性差異懸殊——10%小鼠腦勻漿需稀釋30-60倍，10%小鼠肺勻漿需稀釋150-300倍，胎牛血清稀釋2-10倍，293細胞稀釋4-10倍。正式測定前必須選擇2-3個預期差異較大的樣本進行預實驗。預實驗的核心目標是確定待測樣本的最佳稀釋倍數，使測定值落在標準曲線的中段區域（線性范圍的中心部分），此區域的定量準確度較高。稀釋倍數過低會導致信號飽和（熒光強度超出儀器檢測上限），稀釋倍數過高則信號接近空白值，兩種情形均無法獲得可靠數據。